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土壤中磷脂脂肪酸（PLFA）的測(cè)定
閱讀：988 發(fā)布時(shí)間：2024-7-3PLFAs是幾乎所有活體細(xì)胞膜的主要成分，周轉(zhuǎn)速率極快且隨細(xì)胞死亡而迅速降解,，脂肪酸結(jié)構(gòu)與種類多樣,，對(duì)環(huán)境因素敏感，分析結(jié)果重復(fù)性較好,。既可用簡(jiǎn)單試劑和設(shè)備測(cè)定由PLFAs轉(zhuǎn)化的磷酸鹽以確定微生物總量,，也可以根據(jù)不同菌群的特定脂肪酸C鏈長(zhǎng)度、飽和度及羥基等取代基位置差異研究特殊功能菌群,。在微生物定量及活力測(cè)定方面,，PLFAs與微生物量C、底物誘導(dǎo)呼吸（SIR）及ATP等測(cè)定方法所得結(jié)果十分吻合,。因此,，PLFAs在土壤微生物學(xué)研究中很有潛力。
磷脂脂肪酸在土壤中的功能主要包括以下幾個(gè)方面：
（1）作為細(xì)胞膜的組成成分,，參與微生物的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能,。
（2）可以作為能源來源，供給微生物進(jìn)行代謝和生長(zhǎng),。
（3）參與土壤中的有機(jī)質(zhì)的分解和循環(huán)過程,。
（4）對(duì)土壤中的酶活性和微生物群落結(jié)構(gòu)具有調(diào)節(jié)作用。
實(shí)驗(yàn)步驟
（1）稱3 g土壤與15 ml 0.2M甲醇化的KOH混勻,，放入離心管中,。
（2）在37℃培養(yǎng)1 h，每10 min漩渦震蕩一次,。
（3）加入3 ml 1.0 M冰醋酸10 ml正己烷,，分層,。
（4）4800 r離心15 min。
（5）取上清移至試管,，在氮?dú)庀麓蹈伞?/span>
（6）將試管內(nèi)磷脂脂肪酸溶解于0.5 ml 1:1甲基叔丁基醚:正己烷,，轉(zhuǎn)移到氣質(zhì)聯(lián)用色譜分析用小管待分析。
將處理好的樣品用Agilent 6890GC / 5973 MS氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行分析,，參數(shù)設(shè)定如下：
色譜柱：利用處理后的石英毛細(xì)管柱（0.25 mm×30 nm×0.25 um）,。
樣口溫度為250℃，不分流進(jìn)樣,。
采用恒流模式,，流速為0.8 ml/min，載氣為高純氦氣,。
程序升溫：80℃（保持2 min）,，以50°C/min的速度升至150 ℃（保持2 min），以2.5°C/min的速度升至195°C（保持3 min）,，再以2.5°C/min的速度升至240℃（保持5 min）,。
電離方式：EI（70eV）
離子源溫度：150 ℃
四極桿溫度：230 ℃
接口溫度：280 ℃
掃描方式：SIM
C14:0是外標(biāo)物
磷脂脂肪酸含量計(jì)算公式
PLFA（nmol/g土樣）=（PPLFA × S × V）/（POSTD × D × R × W）
式中PPLFA和POSTD分別是樣品和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的峰值面積，s為外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度（ng·ul-1）,，V為樣品的測(cè)定體積（ul）,，R為分取倍數(shù)，D為稀釋倍數(shù),，W為烘干土質(zhì)量（g）,。