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細(xì)胞增殖檢測——EdU檢測法
閱讀：856 發(fā)布時間：2024-4-1細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征,，指細(xì)胞在周期調(diào)控因子的作用下，通過DNA復(fù)制等反應(yīng),，完成細(xì)胞分裂的過程,。增殖檢測一般是分析分裂中細(xì)胞的數(shù)量變化，進(jìn)而反映細(xì)胞的生長狀態(tài)及活性,，目前廣泛應(yīng)用于腫瘤生物學(xué),，分子生物學(xué)，藥代動力學(xué)等領(lǐng)域,。
細(xì)胞增殖檢測的方法眾多,，應(yīng)用非常廣泛，按檢測原理主要分為4 類：檢測DNA合成,、檢測代謝活性,、檢測細(xì)胞增殖相關(guān)抗原和檢測ATP濃度。其中,，細(xì)胞DNA合成檢測是通過測定細(xì)胞的DNA合成量來評價細(xì)胞的增殖能力,，直接測定DNA合成是檢測細(xì)胞增殖最準(zhǔn)確的方法，它是測定物質(zhì)毒性,、評估藥物安全評價,、判斷細(xì)胞健康、細(xì)胞增殖等研究方向常用方法之一,，常用的檢測試劑主要是EdU,、BrdU等。
實驗原理
EdU（5-Ethynyl-2'-deoxyuridine）與BrdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物，它們能夠在細(xì)胞增殖時期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在復(fù)制的DNA分子,，然后分別利用免疫熒光技術(shù)、與Apollo熒光染料特異性反應(yīng)檢測細(xì)胞增殖情況,。
傳統(tǒng)的BrdU有一大缺點,，就是需要變性DNA后才能與抗體結(jié)合，但這就破壞了DNA雙鏈結(jié)構(gòu),，影響了其他染料的結(jié)合染色,，導(dǎo)致染色彌散，準(zhǔn)確性降低等問題,。而EdU檢測法更簡單,、更快速、更準(zhǔn)確,，不需要嚴(yán)苛的樣品變性(酸解,、熱解、酶解)處理,，有效地避免了樣品損傷,，有助于在組織、器官的整體水平上觀測細(xì)胞增殖的真實情況,，具有更高的靈敏度和更快的檢測速度,。這是一種新型的非放射性同位素細(xì)胞增殖檢測的方法，在細(xì)胞培養(yǎng),、實體組織及臨床研究中得到了廣泛的應(yīng)用,。該技術(shù)可用于細(xì)胞成像、流式,、細(xì)胞示蹤,、DNA損傷修復(fù)檢測、線粒體活性檢測以及病毒增殖活性檢測等,。
