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外泌體的主流共識(shí)---電鏡、NTA和WB實(shí)驗(yàn)
閱讀:927 發(fā)布時(shí)間:2023-8-11外泌體的形狀是杯狀或茶托形,,可以通過(guò)電鏡觀(guān)察形態(tài)進(jìn)行初步確定,外泌體的粒徑大小在30-120nm左右,,通過(guò)NTA可以檢測(cè)到粒徑大小,,外泌體本身具有一些特殊的標(biāo)志蛋白,通過(guò)WB可以檢測(cè)出來(lái),。
目前鑒定外泌體主要包括三方面實(shí)驗(yàn),,但是三方面實(shí)驗(yàn)在鑒定外泌體的存在、數(shù)量和完整性上分別存在一些缺陷,。
可以直觀(guān)的看到粒子的形態(tài),,因此可以用于鑒定外泌體的存在和完整性,但是包括支原體,、鐵蛋白聚團(tuán),、聚乙二醇蛋白聚團(tuán)、溶酶體等的電鏡圖片與外泌體都十分相似,,并且電鏡只能展示局部景象,。因此,電鏡成像無(wú)法區(qū)分外泌體及形態(tài)相近的納米粒子,,且不能反映樣品中的外泌體數(shù)量,。
是一種測(cè)算粒子群體直徑分布和粒子數(shù)量的計(jì)算方法,,它通過(guò)光學(xué)原理感知粒子的存在,因此可以確認(rèn)外泌體樣品中的“外泌體"數(shù)量和直徑的群體特征,,但是無(wú)法確認(rèn)檢測(cè)到的粒子是否為外泌體,,不能反映粒子形態(tài),無(wú)法將外泌體和其他納米粒子區(qū)分開(kāi),。因此NTA不能確認(rèn)外泌體的真實(shí)存在和外泌體的完整性,。
可以鑒定外泌體中存在的特定蛋白,WB檢測(cè)外泌體標(biāo)志蛋白可以說(shuō)明外泌體成分的存在,。但是目前的這些標(biāo)志物蛋白只是會(huì)在外泌體里富集,,而并不是外泌體所有的,諸如CD63,、ALIX等在細(xì)胞中都有,,在一些細(xì)胞碎片、溶酶體,、胞內(nèi)體中也大量存在,。因此,WB僅能證實(shí)外泌體成分的存在,,無(wú)法確認(rèn)外泌體的數(shù)量和完整性,。
因此,通過(guò)三個(gè)實(shí)驗(yàn)的相互佐證來(lái)確認(rèn)外泌體的存在,、數(shù)量和完整性,。當(dāng)且僅當(dāng)三個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果都正常(即電鏡看到經(jīng)典結(jié)構(gòu),WB檢測(cè)到外泌體標(biāo)志物的富集,,NTA測(cè)算直徑分布符合外泌體定義),,才能確認(rèn)研究者成功的分離純化了外泌體,基于這一成功的分離方法所得到的后續(xù)研究結(jié)果才能認(rèn)為是外泌體相關(guān)的研究結(jié)果,。其實(shí),,好的鑒定方法應(yīng)當(dāng)是免疫電鏡結(jié)合NTA,但是免疫電鏡的難度過(guò)高,,因此最終形成了電鏡,、NTA和WB三個(gè)實(shí)驗(yàn)鑒定外泌體的主流共識(shí)。