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檸檬酸（Citric Acid, CA）,，又稱(chēng)枸櫞酸,，是一種重要的有機(jī)酸，在自然界中分布很廣,，天然的檸檬酸存在于植物如檸檬,、柑橘、菠蘿等果實(shí)和動(dòng)物的骨骼,、肌肉,、血液中。很多種水果和蔬菜,，尤其是柑橘屬的水果中都含有較多的檸檬酸,，特別是檸檬和青檸含有大量檸檬酸。

目前,，可采用分光光度法檢測(cè)檸檬酸（CA）的含量,。

分光光度法是基于物質(zhì)對(duì)光的吸收特性進(jìn)行的。當(dāng)光線穿過(guò)物質(zhì)時(shí),，會(huì)被物質(zhì)吸收,，且吸收程度與物質(zhì)的濃度成正比。因此,，通過(guò)測(cè)量光線通過(guò)物質(zhì)時(shí)的吸光度,，可以確定物質(zhì)的濃度。在 CA 含量檢測(cè)中,，常用的分光光度法包括比色法,、吸光光度法等,。

一、樣品中檸檬酸提?。?/span>

a. 液體樣品中檸檬酸提?。喝?nbsp;0.1mL 液體加試劑一 0.9mL，充分混勻,，11000g/min 4℃離心 10min,， 取上清液，待測(cè),。

b. 組織中檸檬酸提?。悍Q(chēng)約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一,，冰上充分研磨,，11000g/min 4℃離心 10min，取上清液,，待測(cè),。

c. 線粒體中檸檬酸提取：稱(chēng)約 0.1g 組織,，加入 1mL 試劑一,，冰上充分研磨，600g/min,，4℃離心5min,；取上清至另一 EP 管中,，11000g/min,，4℃離心 10min，棄上清（此上清液可用于細(xì)胞質(zhì)CA 含量測(cè)定）,；向沉淀中加試劑二 200µL,，以及試劑三 2µL，充分懸浮溶解,，11000g/min,，4℃離心 10min，取上清液,，待測(cè),。

二、測(cè)定：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min 以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 545 nm,，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑一置于 30℃水浴中預(yù)熱 30min 以上,。

3. 按下圖在 1.5mLEP 管中加入相應(yīng)試劑