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茁彩生物｜一步法Elisa換新裝
閱讀：1603 發(fā)布時(shí)間：2022-2-23
首先，帶大家溫故下酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay,，簡(jiǎn)寫(xiě)ELISA）,，此方法可用于研究領(lǐng)域中的許多靶標(biāo)，包括細(xì)胞因子,，趨化因子,，生長(zhǎng)因子，磷酸特異性靶標(biāo),，免疫球蛋白,，免疫腫瘤學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)。由于技術(shù)方法成熟,，操作流程簡(jiǎn)單,，此方法學(xué)深受廣大科研工作者青睞,。
那么,ELISA實(shí)驗(yàn)中具體又分為哪幾種檢測(cè)類型呢？
01 夾心法
①將含有已知抗體的抗血清吸附在微量滴定板上的小孔里,，洗滌一次,；
②加待測(cè)抗原，如兩者是特異的,，則發(fā)生結(jié)合,，然后把多余抗原洗除；
③加入與待測(cè)抗原呈特異反應(yīng)的酶聯(lián)抗體,，使形成“夾心",；
④加入該酶的底物，若看到有色的酶解產(chǎn)物產(chǎn)生,，說(shuō)明在孔壁上存在相應(yīng)的抗原,。
02 間接法
此法是檢測(cè)抗體常用的方法。將已知抗原吸附于固相載體上,，加入待測(cè)血清(抗體)與之結(jié)合,，洗滌后，加酶標(biāo)抗體和底物進(jìn)行測(cè)定,。
03 競(jìng)爭(zhēng)法
此法主要用于小分子物質(zhì),、激素、藥物及半抗原的定量測(cè)定,。以測(cè)定抗原為例,，將特異性抗體吸附于固相載體上，加入待測(cè)抗原和一定量的已知酶標(biāo)抗原,，使二者競(jìng)爭(zhēng)地與固相抗體結(jié)合,，經(jīng)過(guò)洗滌分離，最后結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原與待測(cè)抗原含量呈負(fù)相關(guān),。
到這里我們應(yīng)該會(huì)問(wèn)一句,，什么叫“一步法" ？
不要著急,，小Z先用“一步法"跟傳統(tǒng)方法做個(gè)對(duì)比：
以上圖例,，相信大家很明顯的看出“一步法"優(yōu)化了操作步驟,，縮減了操作時(shí)間,，避免了不必要的誤差。
此刻你們腦海里面應(yīng)該飄過(guò)很多問(wèn)號(hào)吧,？
小Z再給你們剖析一下“一步法" 的優(yōu)化方案
梯度標(biāo)準(zhǔn)品（即用型）試劑盒提供已知濃度的6支標(biāo)準(zhǔn)品,，可直接使用；
樣本充足的情況下,，離心后可以直接加樣,，無(wú)需樣本稀釋，避免污染；
一次性洗板,，簡(jiǎn)約時(shí)間,，減少誤差；
直接讀數(shù),，90分鐘搞定ELISA,，實(shí)現(xiàn)時(shí)間上“質(zhì)"的飛躍；
