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茁彩生物通用的樣本處理方法

• 土壤：

  稱取1g土壤,，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,，用手工將標本充分混勻。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細收集上清,。

• 糞便：

  稱取1g糞便，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,，用手工將標本充分混勻,。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細收集上清,。

• 咽拭子：

  加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS,，溶解咽拭子頭部，搖勻,，用鑷子取出咽拭子并擠干液體,，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細收集上清,。分裝一份待檢測,，其余冷凍備用,，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。如果是測分泌蛋白,，直接取上清檢測，測試細胞內(nèi)蛋白,，要破碎細胞,。

• 植物標本(精提):
  1、 稱取0.1g（誤差±3%以內(nèi)）新鮮植物組織樣本,，在液氮中充分研磨,；
  2、 加入1ml的提取液（80%甲醇）, 置于-20度過夜,；
  3,、 于4度，8000rpm,，離心20分鐘,，取上清；
  4,、 上清液過C-18固相萃取柱,。具體步驟是： 80%甲醇（1ml）平衡柱→上樣→收集樣品→移開樣品后用100%甲醇（5ml）洗柱→100%yi mi（5ml）洗柱→100%甲醇（5ml）洗柱→循環(huán)。過柱后的樣本真空干燥或氮氣吹干,，保存?zhèn)溆茫?br />5,、 上樣前加入pH7.4 PBS緩沖液（1ml定容）?；靹蚝笫覝胤胖?0分鐘,，然后4度離心（8000rpm，15分鐘）,，取上清并暫時保存于4度待用,。

• 植物標本(推薦):

  用預(yù)冷的 PBS (0.01mol/L, pH=7.2-7.4)沖洗組織，去除殘留物質(zhì)（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果）,，稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的 PBS（一般按 1:9 的重量體積比，比如 1g 的組織樣品對應(yīng) 9mL 的 PBS,，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,，并做好記錄。推薦在 PBS 中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中,，于冰上充分研磨,。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎,，或反復(fù)凍融,。后將勻漿液于 5000×g 離心 5~10 分鐘,，取上清檢測,。

• 牛奶：

  用無菌管收集,，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。

• 蜂蜜：

  用無菌管收集,，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。

• 培養(yǎng)的細胞:

  A、動物細胞：用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液,，使細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融（如果反復(fù)凍融，破碎效果不好,，就采用超聲波破碎）,，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。

  B,、植物細胞：用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液，使細胞濃度達到100萬/ml左右,，置于冰盒上,，用超聲破碎儀，設(shè)置破碎2s,，冷卻30s的方式,，充分破碎細胞，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。

  C、組織的細胞切割標本后,，稱取1g組織,，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，去除上清,，再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗滌沉淀的細胞三遍。再用上述的細胞破碎方法破碎細胞,。

• 尿液：

  用無菌管收集,，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。

• 胸腹水：

  用無菌管收集,，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。

• 腦脊液：

  用無菌管收集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。

   

• 樣本收集注意事項:

  1,、不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

  2,、標本采集后盡快進行實驗，若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  3,、我們羅列的是通用的樣本處理方法,，無法涵蓋各種樣本，對于一些特殊樣本,，建議實驗人員多參考已發(fā)表的文獻,，自行設(shè)計合理的樣本處理方法。

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