大多數(shù)細胞因子是免疫應答的產(chǎn)物,在動物和人體內可發(fā)揮免疫學效應,,終會通過上調免疫細胞對抗原物質的免疫應答,,介導炎癥反應而清除抗原物質。
抗原刺激和病原微生物感染均可誘導體內產(chǎn)生細胞因子,,因此細胞因子與疾病的發(fā)生,、發(fā)展有著密切的關系,它們可參與疾病的發(fā)生,、發(fā)展,。
另一方面,細胞株的培養(yǎng),、凍存和復蘇分為以下三點:
細胞株的培養(yǎng),、凍存和復蘇
1)細胞株的培養(yǎng)和傳代 培養(yǎng): 用于檢測細胞因子的細胞株通常培養(yǎng)于含10%小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中,培養(yǎng)細胞因子依賴細胞株還有加入適量細胞因子,。
在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),,3~4天傳代一次。
★ 懸浮生長細胞的傳代: 直接直接吸去或離心后吸去培養(yǎng)上清液,,用新鮮培養(yǎng)液懸浮細胞,,1:3或1:5稀釋細胞后,,分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
★ 帖壁生長細胞的傳代: 吸去培養(yǎng)液,,用PBS洗滌細胞一次,,加入消化液,在37℃中消化約3~10分鐘,,待細胞開始脫落時,,倒去消化液,加入新鮮培養(yǎng)液,,懸浮和吹打分散細胞,。也可以待細胞全部消化脫落,500×g離心5分鐘,,去除消化液,,用新鮮培養(yǎng)液懸浮細胞。1:3或1:5稀釋細胞后,,分瓶繼續(xù)培養(yǎng),。
2)細胞株的凍存: 1. 取培養(yǎng)2~3天生長旺盛的細胞,用細胞培養(yǎng)液將細胞配成2×106~2×107/ml,。 在1ml細胞凍存管中加入0.5ml細胞懸液,,0.4ml小牛血清和0.1ml二甲基亞砜(或甘油),混勻后密封,。置4℃ 1小時,-20℃ 2小時,,然后直接放入液氮中或置液氮蒸汽上過夜后浸入液氮中,。
3)細胞株的復蘇: 復蘇時,從液氮中取出凍存管,,立即置37℃水浴中融化細胞,。將細胞直接加入10ml含15%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中,置37℃ 5%CO2飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。懸浮細胞待細胞全部沉降后小心吸去上清液,,更換新鮮的上述培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng),;帖壁細胞則培養(yǎng)2~3小時,,待細胞帖壁后,倒去培養(yǎng)液,,更換新鮮的上述培養(yǎng)液,,繼續(xù)培養(yǎng)。也可以在加入新鮮培養(yǎng)液以后,,500×g離心5分鐘,,去上清液,,加入新鮮培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng),。
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