以下通用步驟可以在保持細(xì)胞完整性的同時(shí)從培養(yǎng)器皿中分離多種細(xì)胞系。但這一步驟不能廣泛適用于所有細(xì)胞系,。應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定不同體系所需的佳條件和濃度,。
?在傳代培養(yǎng)時(shí)監(jiān)測(cè)細(xì)胞存活率。
?細(xì)胞存活率應(yīng)大于90%,。
?對(duì)于無(wú)血清培養(yǎng)基,，建議降低胰酶用量。
1.去除器皿中原有細(xì)胞培養(yǎng)基,。
2.用不含鈣鎂的平衡鹽溶液或EDTA清洗細(xì)胞,。將清洗溶液加到培養(yǎng)瓶中與細(xì)胞相對(duì)的一側(cè)。搖動(dòng)培養(yǎng)瓶1-2分鐘以沖洗細(xì)胞層，然后倒掉清洗溶液,。
3.在培養(yǎng)瓶中與細(xì)胞相對(duì)的一側(cè)以2-3ml/25cm2的比例加入選定的解離溶液(見下表),。確保解離溶液能夠覆蓋整個(gè)細(xì)胞層。在37℃下孵育培養(yǎng)瓶,。并輕輕搖動(dòng),。通常細(xì)胞在5-15分鐘內(nèi)解離。不同細(xì)胞系的解離時(shí)間有所不同,。仔細(xì)觀測(cè)解離過(guò)程,，以免損傷細(xì)胞。對(duì)于難從基質(zhì)上解離下來(lái)的細(xì)胞系,，可以輕敲培養(yǎng)瓶以加快解離過(guò)程,。
4.當(dāng)細(xì)胞解離時(shí)，豎直放置培養(yǎng)瓶使細(xì)胞流向培養(yǎng)瓶底部,。向培養(yǎng)瓶中加入培養(yǎng)基,。反復(fù)吹吸單層表面以分散細(xì)胞。計(jì)算細(xì)胞個(gè)數(shù),，然后傳代培養(yǎng)細(xì)胞,。
注意：如果使用無(wú)血清培養(yǎng)基，應(yīng)加入大豆胰酶抑制劑,。對(duì)于0.25mg/ml的胰酶抑制劑,，一般按1：1(體積比)的比例加入即可抑制胰酶。細(xì)胞
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