蛋白質(zhì)的保存是一個(gè)比較棘手的問題,，分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的童鞋們或多或少都會(huì)碰到,。
有沒有遇到過，不同批次純化的蛋白,，采用同樣的測試方法,，活性卻不太一樣？
有沒有遇到過新純化的蛋白,，從冰箱拿出融化后,，居然沉淀了？
蛋白質(zhì)純化后,，保存方式都有哪些呢,？
一、謹(jǐn)記蛋白質(zhì)的保存原則
低溫,、分裝,、濃縮,、速凍/速融、添加劑
二,、保存方法你知多少
蛋白質(zhì)的的保存方法的選擇取決于蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性以及保存后什么時(shí)候再次使用你的蛋白,。
1、如即提即用的話,，可將濃縮蛋白質(zhì)儲(chǔ)存在單一溶液(如PBS),，置于聚丙烯管或干凈的玻璃容器中，放在4°C冰箱保存,。
優(yōu)點(diǎn)：蛋白容易獲得,，可以快速進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，且同一管樣品可重復(fù)取樣,，這樣避免了因經(jīng)常解凍而加速蛋白的降解,。
缺點(diǎn)：可能會(huì)面臨微生物污染，蛋白質(zhì)失活和氧化,，可能對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的均一性造成影響,。要避免這種情況，可以把蛋白質(zhì)分成小份儲(chǔ)存,，并加入蛋白酶抑制劑,、抗菌劑和還原劑等。但也要根據(jù)自己蛋白的情況,，如果你的蛋白是完整的膜蛋白或分泌蛋白,很可能分子內(nèi)存在二硫鍵,，為保證其完整性，應(yīng)該存儲(chǔ)在氧化環(huán)境中,。另外,，儲(chǔ)存時(shí)間超過一個(gè)月的蛋白可以考慮扔掉。
2,、透析到合適的緩沖液中可以凍干,，放4°保存；也可加高濃度的硫酸銨(你的蛋白不沉淀的話),，4°保存,。
注意：你要注意加入硫酸銨后pH會(huì)下降一些，你的緩沖液可不能太接近蛋白的等電點(diǎn)啊,，蛋白在等電點(diǎn)附近沉淀很多時(shí)候是不可復(fù)溶,，即使復(fù)溶活性也不能保證。
3,、純化后的蛋白測濃度后,，加入50%甘油，確認(rèn)混勻后分裝,，液氮速凍,，放入-20度或-80度保存,，尤其適用于酶類。
優(yōu)點(diǎn)：在低溫下,，蛋白質(zhì)對(duì)微生物污染,，蛋白酶降解和氧化反應(yīng)更有抵抗力，容易保證其活性,。用甘油或乙二醇稀釋使蛋白處于溶液中,，可以方便取樣。此外,，這種方式儲(chǔ)存的蛋白質(zhì)可以保存長達(dá)一年,，對(duì)于抗體軛合物是一個(gè)好的選擇。
缺點(diǎn)： 蛋白質(zhì)在-20°溶液中仍有可能遭受水解,、污染和氧化,，如果蛋白對(duì)還原性環(huán)境要求比較高，也需加入抑制劑,、還原劑等,。而且將樣品存放在50%冷凍保護(hù)劑中有時(shí)是不可取的，取決于你接下來要做的實(shí)驗(yàn),。
4,、有些蛋白可以不加甘油,，直接液氮速凍幾分鐘,，-80度保存。
優(yōu)點(diǎn)：可以長期保存(多年),，不需要甘油,、*等化學(xué)物質(zhì)，避免蛋白質(zhì)降解或微生物污染,。
缺點(diǎn)：冷凍蛋白質(zhì)應(yīng)一次性使用,，為了避免反復(fù)凍融發(fā)生降解。此外,抗體軛合物(特別是堿性磷酸酶復(fù)合物)冷凍后可能會(huì)失活,。
5,、長期保存蛋白質(zhì)的另一個(gè)方式是凍干(lyophilization)。
優(yōu)點(diǎn)：蛋白質(zhì)凍干后會(huì)呈現(xiàn)蓬松的白色粉末形式,，處于脫水的狀態(tài),，可以在冰箱中無限期保存。
缺點(diǎn)：對(duì)于某些蛋白質(zhì),，凍干操作有一個(gè)潛在問題就是蛋白質(zhì)不能復(fù)溶,。凍干/復(fù)溶的過程同樣會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)產(chǎn)生一定的傷害作用。
三,、這些重點(diǎn)你要知道
1,、保證恒定的pH值,，一般PBS最為常用；
2,、保證一定的蛋白濃度,，如果濃度比較稀的話，可以考慮添加一定量的BSA,；
3,、甘油的添加也能在很大程度上提高抗體的穩(wěn)定性；
4. 為了防腐可以添加一定量的*(辣根過氧化物酶偶聯(lián)的二抗一般不能加),，如果樣品要用于生物學(xué)檢測,，避免使用防腐劑。
5,、無論是冷凍還是儲(chǔ)存在溶液中,，將蛋白進(jìn)行分裝，以避免凍融,，降低污染的風(fēng)險(xiǎn),。
6、進(jìn)行蛋白質(zhì)操作實(shí)驗(yàn)時(shí)一定要帶手套,，們的皮膚上有一些蛋白酶,，這些蛋白酶很可能會(huì)降解掉我們的蛋白樣品。皮膚上的其他化學(xué)分子也可能會(huì)污染蛋白樣品,。另外,，為了防止細(xì)菌的生長，蛋白質(zhì)最好保存在滅菌的小管中,。
7,、避免反復(fù)凍融或凍干重溶解過程，這樣很可能會(huì)降低生物活性,。
8,、避免震蕩，震蕩產(chǎn)生的剪切力有可能會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)產(chǎn)生破壞作用,。震蕩時(shí)溶液中會(huì)產(chǎn)生氣泡,，氧氣的進(jìn)入會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)處在氧化環(huán)境中。蛋白質(zhì)中含有半胱氨酸,，其極易被氧化為胱氨酸,，這一過程很可能會(huì)破環(huán)蛋白質(zhì)的活性。
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