蛋白質(zhì)的保存是一個比較棘手的問題，分子生物學實驗室的童鞋們或多或少都會碰到,。
有沒有遇到過,，不同批次純化的蛋白,，采用同樣的測試方法，活性卻不太一樣,？
有沒有遇到過新純化的蛋白,，從冰箱拿出融化后，居然沉淀了,？
蛋白質(zhì)純化后，保存方式都有哪些呢,？
一,、謹記蛋白質(zhì)的保存原則
低溫,、分裝、濃縮,、速凍/速融,、添加劑
二、保存方法你知多少
蛋白質(zhì)的的保存方法的選擇取決于蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性以及保存后什么時候再次使用你的蛋白,。
1、如即提即用的話,，可將濃縮蛋白質(zhì)儲存在單一溶液(如PBS),，置于聚丙烯管或干凈的玻璃容器中，放在4°C冰箱保存,。
優(yōu)點：蛋白容易獲得，可以快速進行實驗,，且同一管樣品可重復(fù)取樣,，這樣避免了因經(jīng)常解凍而加速蛋白的降解。
缺點：可能會面臨微生物污染,，蛋白質(zhì)失活和氧化,，可能對實驗數(shù)據(jù)的均一性造成影響。要避免這種情況,，可以把蛋白質(zhì)分成小份儲存,，并加入蛋白酶抑制劑,、抗菌劑和還原劑等。但也要根據(jù)自己蛋白的情況,，如果你的蛋白是完整的膜蛋白或分泌蛋白,很可能分子內(nèi)存在二硫鍵,，為保證其完整性，應(yīng)該存儲在氧化環(huán)境中,。另外,，儲存時間超過一個月的蛋白可以考慮扔掉,。
2,、透析到合適的緩沖液中可以凍干,，放4°保存；也可加高濃度的硫酸銨(你的蛋白不沉淀的話),，4°保存,。
注意：你要注意加入硫酸銨后pH會下降一些，你的緩沖液可不能太接近蛋白的等電點啊,，蛋白在等電點附近沉淀很多時候是不可復(fù)溶,，即使復(fù)溶活性也不能保證。
3,、純化后的蛋白測濃度后,，加入50%甘油,，確認混勻后分裝,，液氮速凍，放入-20度或-80度保存,，尤其適用于酶類,。
優(yōu)點：在低溫下,，蛋白質(zhì)對微生物污染，蛋白酶降解和氧化反應(yīng)更有抵抗力,，容易保證其活性,。用甘油或乙二醇稀釋使蛋白處于溶液中,，可以方便取樣。此外,，這種方式儲存的蛋白質(zhì)可以保存長達一年,，對于抗體軛合物是一個好的選擇。
缺點： 蛋白質(zhì)在-20°溶液中仍有可能遭受水解,、污染和氧化，如果蛋白對還原性環(huán)境要求比較高,，也需加入抑制劑,、還原劑等。而且將樣品存放在50%冷凍保護劑中有時是不可取的,，取決于你接下來要做的實驗。
4,、有些蛋白可以不加甘油,，直接液氮速凍幾分鐘，-80度保存,。
優(yōu)點：可以長期保存(多年)，不需要甘油,、*等化學物質(zhì),，避免蛋白質(zhì)降解或微生物污染。
缺點：冷凍蛋白質(zhì)應(yīng)一次性使用,，為了避免反復(fù)凍融發(fā)生降解。此外,抗體軛合物(特別是堿性磷酸酶復(fù)合物)冷凍后可能會失活,。
5,、長期保存蛋白質(zhì)的另一個方式是凍干(lyophilization),。
優(yōu)點：蛋白質(zhì)凍干后會呈現(xiàn)蓬松的白色粉末形式，處于脫水的狀態(tài),，可以在冰箱中無限期保存,。
缺點：對于某些蛋白質(zhì),，凍干操作有一個潛在問題就是蛋白質(zhì)不能復(fù)溶。凍干/復(fù)溶的過程同樣會對蛋白質(zhì)產(chǎn)生一定的傷害作用,。
三,、這些重點你要知道
1,、保證恒定的pH值，一般PBS最為常用,；
2,、保證一定的蛋白濃度，如果濃度比較稀的話,，可以考慮添加一定量的BSA,；
3、甘油的添加也能在很大程度上提高抗體的穩(wěn)定性,；
4. 為了防腐可以添加一定量的*(辣根過氧化物酶偶聯(lián)的二抗一般不能加)，如果樣品要用于生物學檢測,，避免使用防腐劑,。
5、無論是冷凍還是儲存在溶液中,，將蛋白進行分裝,，以避免凍融，降低污染的風險,。
6、進行蛋白質(zhì)操作實驗時一定要帶手套,，們的皮膚上有一些蛋白酶,，這些蛋白酶很可能會降解掉我們的蛋白樣品。皮膚上的其他化學分子也可能會污染蛋白樣品,。另外,，為了防止細菌的生長，蛋白質(zhì)最好保存在滅菌的小管中,。
7、避免反復(fù)凍融或凍干重溶解過程,，這樣很可能會降低生物活性。
8,、避免震蕩,，震蕩產(chǎn)生的剪切力有可能會對蛋白質(zhì)產(chǎn)生破壞作用,。震蕩時溶液中會產(chǎn)生氣泡,，氧氣的進入會導致蛋白質(zhì)處在氧化環(huán)境中。蛋白質(zhì)中含有半胱氨酸,，其極易被氧化為胱氨酸,，這一過程很可能會破環(huán)蛋白質(zhì)的活性。
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