16S+ITS測序是對特定長度的PCR產(chǎn)物或者捕獲的片段進行測序,,目前主要是應用高通量測序技術對特定環(huán)境中特定遺傳物質進行測序。大多數(shù)天然微生物都不能通過傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)方法進行分離和克隆,,這對于天然微生物定性和定量,探索微生物多樣性是嚴重的挑戰(zhàn),。擴增子測序可以克服傳統(tǒng)分離培養(yǎng)的弱點,,對樣品中的微生物進行定性和定量,目前在微生物多樣性檢測中廣泛應用,。 16S+ITS測序的原理和用途:
16SrDNA測序:16SrDNA是編碼16SrRNA的基因,,存在于所有細菌基因組。其既能體現(xiàn)不同菌屬之間的差異,,又能利用測序技術較容易地得到其序列,,目前被廣泛用于病原菌的檢測和鑒定。它的可變區(qū)經(jīng)常用于不同微生物群落的屬或種系統(tǒng)進化分類,。
ITS測序:在真核生物中,,18SrDNA和28SrDNA轉錄間隔序列稱為ITS區(qū)。由于其是非轉錄區(qū),,承受的選擇壓力較小,,變異強;屬于中度保守區(qū)域,利用它可研究種及種以下的分類階元,。
16S+ITS測序技術優(yōu)勢:
較低的成本:與宏基因組測序相比,,對測序深度的要求更低,性價比較高,;
鑒定效率高:與克隆或培養(yǎng)等傳統(tǒng)鑒定方法相比,,微生物群16S/ITS測序是一種更快、更準確的方法,。
高靈敏度:可以鑒定出豐度極低的細菌,。
雙區(qū)檢測:針對一個或多個可變區(qū)域的靈活性,能夠進行更長的序列讀取,,并能夠對菌落進行更準確的分析,。

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