HE染色。

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染色結(jié)果觀察蘇木精—伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,，簡稱HE染色法,，石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一。蘇木精染液為堿性,，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色,；伊紅為酸性染料，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色,。

細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色,，軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色,，粘液呈灰藍(lán)色,。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色，胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強(qiáng)的鮮紅色,。膠原纖維呈淡粉紅色,，彈力纖維呈亮粉紅色，紅血球呈橘紅色,，蛋白性液體呈粉紅色,。著色情況與組織或細(xì)胞的種類有關(guān)，也隨其生活周期及病理變化而改變,。例如,，細(xì)胞在新生時(shí)期胞漿對伊紅著色較淡或輕度嗜堿，當(dāng)其衰老時(shí)或發(fā)生退行性變則呈現(xiàn)嗜伊紅濃染,。膠原纖維在老化和出現(xiàn)透明變性時(shí),，伊紅著色由淺變深。

細(xì)胞核裂解,、溶解,、細(xì)胞腫脹、細(xì)胞膜不完整的特征,。神經(jīng)元細(xì)胞周圍有空白區(qū)域,，提示有水腫的存在。

小鼠飼喂了高脂肪食品,，在血管周圍可見脂肪空洞,。水泡樣變性和脂肪變性 炎癥細(xì)胞浸潤。

在HE染色條件下,，脂類均會被染色過程中使用到的二甲苯等有機(jī)溶劑溶解而成空泡或空斑樣,，一般情況下，空泡樣脂滴輪廓清晰,，易于分辨,。但是為了證明確實(shí)是脂類,，還需用針對脂類的特殊染料及染色方法，如油紅,，蘇丹黑等,。

脂肪變性在石蠟切片HE染色下的有兩個特點(diǎn)：1.細(xì)胞核被脂滴擠向一側(cè)，2.由于脂肪被溶解,，空泡很干凈,，邊緣整齊。

空泡變性：核在中央,，空泡內(nèi)有網(wǎng)狀物質(zhì)邊緣不整齊。

染色步驟

1,、取材與固定：

從人或動物新鮮尸體上取下組織塊(一般厚度不超過0．5厘米)投入預(yù)先配好的固定液中(10％福爾馬林,，Bouin氏固定液等)使組織、細(xì)胞的蛋白質(zhì)變性凝固,，以防止細(xì)胞死后的自溶或細(xì)菌的分解,，從而保持細(xì)胞本來的形態(tài)結(jié)構(gòu)。

2,、脫水透明：

一般用由低濃度到高濃度酒精作脫水劑,，逐漸脫去組織塊中的水份。再將組織塊置于既溶于酒精,，又溶于石蠟的透明劑二甲苯中透明,，以二甲苯替換出組織塊的中酒精，才能浸蠟包埋,。

3,、浸蠟包埋：

將已透明的組織塊置于已溶化的石蠟中，放入溶蠟箱保溫,。待石蠟*浸入組織塊后進(jìn)行包埋：先制備好容器(如折疊一小紙盒),，倒入已溶化的石蠟，迅速夾取已浸透石蠟的組織塊放入其中,。冷卻凝固成塊即成,。包埋好的組織塊變硬，才能在切片機(jī)上切成很薄的切片,。

4,、切片與貼片：

將包埋好的蠟塊固定于切片機(jī)上，切成薄片,，一般為5—8微米厚,。切下的薄片往往皺折，要放到加熱的水中燙平,，再貼到載玻片上,，放45℃恒溫箱中烘干,。

5、脫蠟染色：

常用HE染色,，以增加組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)各部分的色彩差異,，利于觀察。蘇木精(Hematoxylin,，H)是一種堿性染料,，可將細(xì)胞核和細(xì)胞內(nèi)核糖體染成藍(lán)紫色，被堿性染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜堿性,。伊紅(Eosin,，E)是一種酸性染料，能將細(xì)胞質(zhì)染成紅色或淡紅色,，被酸性染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜酸性,。染色前，須用二甲苯脫去切片中的石蠟,，再經(jīng)由高濃度到低濃度酒精,，最

后入蒸餾水，就可染色,。HE染色過程是：

①將已入蒸餾水后的切片放入蘇木精水溶液中染色數(shù)分鐘,。 ②酸水及氨水中分色，各數(shù)秒鐘,。③流水沖洗1小時(shí)后入蒸餾水片刻,。

④入70％和90％酒精中脫水各10分鐘。⑤入酒精伊紅染色液染色2—3分鐘,。

6,、脫水透明：

染色后的切片經(jīng)純酒精脫水，再經(jīng)二甲苯使切片透明,。

7,、封固：

將已透明的切片滴上加拿大樹膠，蓋上蓋玻片封固,。待樹膠略干后,，貼上標(biāo)箋，切片標(biāo)本就可使用

                                                                                                                                  本篇轉(zhuǎn)至實(shí)驗(yàn)之家