血清使用中常見(jiàn)問(wèn)題
                                                                  檢碩科學(xué)上海有限公司

      胎牛血清,、新生牛血清、小牛血清有何區(qū)別,？
胎牛血清：指健康母牛正常分娩前采集胎牛血液加工而成的血清,，其胎球蛋白較多，血清白蛋白含量高,，而r-球蛋白含量極低甚至沒(méi)有,，并富含多種生長(zhǎng)因子，是培養(yǎng)細(xì)胞zuiyou質(zhì)的血清。

新生牛血清：指健康母牛正常分娩后不久采集加工而成的血清,，其內(nèi)含多種生長(zhǎng)因子,。

小牛血清：指出生后飼養(yǎng)一定時(shí)間（一周至六個(gè)月）再采集加工而成的血清，因與外界接觸時(shí)間過(guò)長(zhǎng),，故血清內(nèi)r-球蛋白含量較高,，不利于細(xì)胞培養(yǎng)，特別是不利于病毒研究與疫苗生產(chǎn),。

1,、 如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損？

將血清從冷凍箱取出后,，先置于2～8℃冰箱使之融解,，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,，融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻,。  

長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2－8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素,、纖維蛋白原,、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。因此,，推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清,，并避免反復(fù)凍融。建議血清應(yīng)保存在-2O℃,。若存放于4℃時(shí),，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶,，建議無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),，再放回冷凍。

2,、血清中包含絮狀沉淀,，它們是什么，怎么處理,？

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白,。這是正常特性，不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì),。要除去沉淀,，離心血清（400g，1-2分鐘）或者簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部,，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里（一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀,，因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾）,。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解。所以,，使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃,，沉淀會(huì)自然消失。

3. 為什么要熱滅活血清?

加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng),。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺,，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞,，昆蟲(chóng)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),，推薦使用熱滅活血清。

4. 有必要做熱滅活嗎?

實(shí)驗(yàn)顯示,，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清,，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn),，或*沒(méi)有任何作用,，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低,。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清,，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,，像是“小黑點(diǎn)",，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中,，又會(huì)使此沉淀物更增多,，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增

5. 為什么儲(chǔ)存在冰箱中的胎牛血清會(huì)出現(xiàn)沉淀?

GIBICO的胎牛血清 沒(méi)有預(yù)老化，儲(chǔ)存在2－8℃時(shí),，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素,、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁,。這應(yīng)該不會(huì)影響血清的質(zhì)量,。推薦在－20℃儲(chǔ)存胎牛血清，避免反復(fù)凍融,。

6. 如何避免沉淀物的產(chǎn)生?

解凍血清時(shí)，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃),，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。

解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻,，使溫度及成分均一,，減少沉淀的發(fā)生。

請(qǐng)勿將血清置于37℃太久,。若在37℃放置太久,，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害,，而影響血清的質(zhì)量,。

血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要,，可以無(wú)須做此步驟,。 若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守56℃,，30分鐘的原則,，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高,，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,，都會(huì)造成沉淀物的增多。

7,、細(xì)胞培養(yǎng)中如何防止黑點(diǎn)生成,？

（1）盡可能地減少血清凍融次數(shù)；

（2）培養(yǎng)基無(wú)需37℃水??；

（3）培養(yǎng)基保持最佳PH值7.0-7.2；  

（4）嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì),，容器定期刷洗,；  

（5）掌握細(xì)胞傳代的最佳時(shí)機(jī)，細(xì)胞切勿生長(zhǎng)過(guò)老,。

本篇文章轉(zhuǎn)至實(shí)驗(yàn)之聲