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影響液相色譜分離效果的主要因素有哪些?
流動相因素
1、流動相pH
不同基質(zhì)的填料具有不同的pH適用范圍,。常溫下無定形硅膠在純水中的溶解度約為100mg·L-1,,且在pH 1~9的范圍內(nèi)溶解的硅膠量幾乎是常量,考慮到溶解速度的影響,對于硅膠基質(zhì)的填料,其所能承受的流動相pH范圍約為1~8,。
鍵合相硅膠填料則由于鍵合層的屏蔽作用,使填料對流動相的適應(yīng)范圍大大增加,,如現(xiàn)在廣泛使用的反相色譜填料C18 (十八烷基硅烷鍵合硅膠),其pH適用范圍可達(dá)2~10,。當(dāng)流動相pH值超出酸性范圍時,,鍵合相易發(fā)生水解而流失;當(dāng)流動相pH超出堿性范圍時,,會加速硅膠的溶解而釋放出絮狀物堵塞柱子,,這兩種反應(yīng)均是不可逆反應(yīng),特別是在溫度較高(>40℃)的環(huán)境下,,會使柱效迅速降低而報廢,。
2、流動相變質(zhì)
當(dāng)前使用*為廣泛的是硅基鍵合相填料,,當(dāng)以水溶液作為流動相或流動相中含有一定濃度的磷酸鹽緩沖液時,,水溶液中或緩沖鹽溶液中會滋生出一些細(xì)菌或霉菌,從而堵塞固定相顆粒間的空隙,。特別是對于多元自動比例混合的高效液相色譜儀來說,水相或緩沖鹽相獨立存貯,因存放時間較長而容易發(fā)生此類問題,。
3,、流動相純度
目前,廣泛使用的填料顆粒粒徑范圍在3~10μm,,孔徑在6~10nm,,色譜柱在使用中會有大量的流動相通過,如流動相含有微量不溶性雜質(zhì)顆粒,,則很容易在柱頭部位被截留,,久而久之,造成色譜柱機(jī)械性堵塞,,引起柱壓升高而無法正常使用,。
4、其它因素
如,,流動相的極性對柱子也有一定影響,,甲醇、水,、冰醋酸等極性較大的物質(zhì)會破壞硅膠填料柱,,正丁醇、二氯甲烷等極性小的物質(zhì)會破壞化學(xué)鍵合硅膠柱,堿性溶液會破壞陽離子交換樹脂色譜柱,酸性溶液容易損壞陰離子交換樹脂柱,。
樣品因素
1,、樣品的溶解性
樣品試樣在配制中,如有少量微粒未能*溶解,,則會隨試樣一起進(jìn)入色譜柱,,同樣,會沉積在柱頭處,,造成色譜柱的堵塞,。
2、樣品的純度
樣品中可能含有待分析組分以外的各種組分或雜質(zhì),,這些組分或雜質(zhì)可能會在柱內(nèi)產(chǎn)生不可逆吸附,,從而,使固定相的活性點被覆蓋,,保留特性發(fā)生變化,。
3、樣品的化學(xué)性質(zhì)
待測試樣中的各種組分與填料之間應(yīng)具有化學(xué)穩(wěn)定性,,比較典型的是在使用氨基鍵合柱時,,應(yīng)避免使用含羰基的化合物和流動相,如,,丙酮,、乙酸乙酯等,以免固定相中的NH2和酐,、酮發(fā)發(fā)希夫(Schiff)縮合而使固定相破壞,。
其它因素
影響色譜柱壽命的因素很多,除流動相和樣品因素外,,還有其它一些外在因素,,如,柱壓的影響,,溫度的影響,,色譜柱的正確沖洗,色譜柱的正確安裝等,。