Bioradpcr儀維修 伯樂：*,；*.

BioRad酶標(biāo)儀熒光分析技術(shù)是一種強(qiáng)大的分析手段,，廣泛地應(yīng)用在臨床檢驗(yàn),、生物學(xué)研究,、農(nóng)業(yè)科學(xué),、食品和環(huán)境科學(xué)中,，是多功能酶標(biāo)儀的重要應(yīng)用，如TECAN(M1000,、M200等),，Thmeral(Varioskan Flash),，Bio-tek（Synergy 4等），MD（M2,、M5）都可以應(yīng)用于熒光檢測(cè),。

BioRad酶標(biāo)儀概述；
室溫下,，大多數(shù)分子處于基態(tài)的低振動(dòng)能級(jí),，處于基態(tài)的分子吸收能量（光能、化學(xué)能,、電能或熱能）后躍遷至激發(fā)態(tài),，激發(fā)態(tài)不穩(wěn)定，將很快衰變到基態(tài),，以光的形式放出能量,，這種現(xiàn)象稱為“發(fā)光現(xiàn)象”。分子發(fā)光包括熒光,，磷光,，化學(xué)發(fā)光，生物發(fā)光等,。受到光照時(shí)發(fā)光,，光照切斷時(shí)發(fā)光立即消失的叫熒光，光照切斷時(shí),，發(fā)光逐漸變?nèi)跻灾孪У慕辛坠?，吸收化學(xué)反應(yīng)的化學(xué)能量而發(fā)光叫化學(xué)發(fā)光，由生物能轉(zhuǎn)變?yōu)楣廨椛涞姆Q作生物發(fā)光,。
由于發(fā)光物質(zhì)不同熒光有分子熒光和原子熒光之分,，分子熒光為帶光譜，原子熒光為線光譜,，通常所說的熒光為分子熒光,。通過測(cè)定所發(fā)射熒光的特性和強(qiáng)度，可以對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性,、定量分析,。

BioRad酶標(biāo)儀熒光檢測(cè)技術(shù)；
1熒光強(qiáng)度
熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)的濃度成正比,，這是熒光分析法是量分析的依據(jù),。在生物學(xué)上的應(yīng)用非常廣泛，可以進(jìn)行生物大分子定量,，酶活性分析,，熒光免疫分析，細(xì)胞學(xué)分析（細(xì)胞增殖，細(xì)胞毒理,，細(xì)胞吸附等）和分子間相互作用,。

1.1細(xì)胞凋亡檢測(cè)
Caspase家族在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過程中起著非常重要的作用,，其中Caspase-3為關(guān)鍵的執(zhí)行分子,，它在凋亡信號(hào)傳導(dǎo)的許多途徑中發(fā)揮功能。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞漿中,，在凋亡的早期階段,，它被激活，活化的Caspase-3由兩個(gè)大亞基（17KD）和兩個(gè)小 亞基（12KD）組成,，裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物,，終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。但在細(xì)胞凋亡的晚期和死亡細(xì)胞,，caspase-3的活性明顯下降,。
設(shè)計(jì)出熒光物質(zhì)偶聯(lián)的短肽Z-DEVD-AMC。在共價(jià)偶聯(lián)時(shí),，AMC不能被激發(fā)熒光,，短肽被水解后釋放出AMC，自由的AMC才能被激發(fā)發(fā)射熒光,。根據(jù)釋放的AMC熒光強(qiáng)度的大小,，可以測(cè)定 caspase-3的活性，從而反映Caspase-3被活化的程度,。 

1.2細(xì)胞毒性的檢測(cè)
體外細(xì)胞毒性研究對(duì)于檢測(cè)新的生物來源或人工合成的細(xì)胞毒素以及例行的臨床相關(guān)的檢測(cè)都有著重要的意義,。細(xì)胞膜非滲透性的核染料 Propidium iodide能穿透損傷的細(xì)胞膜，熒光密度越高反映出其受損細(xì)胞越多,。

1.3鈣流檢測(cè)
Fura-2,、indo-1、Quin-2是Ca2+熒光指示劑,，可以靈敏地反映細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化,，當(dāng)結(jié)合鈣離子時(shí)，大激發(fā)波長(zhǎng)會(huì)發(fā)生改變,，發(fā)射熒光的強(qiáng)度和結(jié)合的Ca2+濃度有著定量的關(guān)系,。

2.熒光偏振(FP)
1926年P(guān)errin首先描述了熒光偏振理論，溶液中的熒光分子在受到偏振光照射時(shí),，可吸收并釋放出相應(yīng)的偏振熒光,，如果在激發(fā)時(shí)熒光物質(zhì)處于靜止?fàn)顟B(tài)，發(fā)射光將保持原有激發(fā)光的偏振性,，如果其處于運(yùn)動(dòng)狀態(tài),，發(fā)射光電偏振偏振平面將不同于原有激發(fā)光的偏振特性，這就是熒光偏振現(xiàn)象，熒光分子與其它因子的相互作用,，例如相互結(jié)合或排斥,；其所處環(huán)境的性質(zhì)，例如溶液的粘度,、溫度等,，這些因素都有可能對(duì)這個(gè)熒光因子受激發(fā)后發(fā)出的發(fā)射光的發(fā)射平面產(chǎn)生影響。因此以熒光偏振為基礎(chǔ)發(fā)展的技術(shù)可用來研究生命科學(xué)中分子之間的相互作用,，如受體配體結(jié)合分析,，DNA－蛋白質(zhì)結(jié)合分析，SNP分析,，酶活性分析,。

熒光偏振分析所需的樣品量少，靈敏度高,，可達(dá)亞納摩爾級(jí)范圍,，重復(fù)性好，操作簡(jiǎn)便,，也更為安全可靠,，不會(huì)在實(shí)驗(yàn)過程中生成有害的放射性**，此外熒光偏振是真正均相的,，允許實(shí)時(shí)檢測(cè)（動(dòng)力學(xué)檢測(cè)）,，對(duì)于濃度變化不敏感，是均相檢測(cè)形式（中間不含洗滌步驟）的解決方案,。
 

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