D10045 Dyngo-4a 1256493-34-1 生物試劑

中文名稱:Dyngo-4a

英文名稱:Dyngo-4a

別名:  3-Hydroxynaphthalene-2-carboxylic acid-(2,4,5-trihydroxybenzylidene)-hydrazide;Hydroxy-Dynasore

CAS No:1256493-34-1分子式:C18H14N2O5分子量:338.30

D10045 Dyngo-4a ≥95% (HPLC)

溶解性：溶于DMSO(67mg/mL)

保存條件：-20℃

包裝：5mg 25mg 100mg in glass bottle

產(chǎn)品描述

一種有效的dynamin抑制劑,，作用于DynI (brain),、DynI (rec)和DynII (rec)，IC50分別為0.38μM,，1.1?μM,，和 2.3μM 。

動力蛋白 GTPase 試驗(yàn)

動力蛋白I的活性在其SAI活性狀態(tài)下測量,，或者由三種不同的方法刺激,。每個刺激使動力蛋白激活到不同程度，每個試驗(yàn)需要不同的動力蛋白濃度。首先,，最大動力蛋白活性通過超聲處理的PS脂質(zhì)體刺激,。純化的動力蛋白I (10–20nM，在6mM Tris–HCl,，20mM NaCl和0.01% Tween 80,，pH 7.4中稀釋)在96孔板GTPase緩沖液(5mM Tris–HCl，10mM NaCl,，2mM Mg2+,，0.05% Tween 80，pH 7.4,，1µg/mL亮抑tai酶和0.1mM PMSF)中與GTP 0.3mM,，在測試化合物存在下，以150μL終測定體積于37°C下培育30分鐘,。將10μL 0.5M 乙二胺四乙酸(EDTA) pH 7.4和孔雀綠溶液(40μL: 2% w/v 鉬酸銨四水合物,，0.15% w/v 孔雀綠和4M HCl)加入5分鐘以終止反應(yīng)。第二步,，動力蛋白(20nM)使用10µg/mL紫shan醇穩(wěn)定的粗品牛腦微管根據(jù)相同的方案進(jìn)行刺激,。第三步，動力蛋白I (50nM)被1μM重組grb2,，一種包含SH3的蛋白質(zhì)刺激,，該刺激比脂質(zhì)體或微管的效力小5-10倍。最后,，動力蛋白(500nM) SAI的活性使用高濃度動力蛋白測量,，這會促進(jìn)其協(xié)同自組裝成環(huán)(但不是螺旋狀)。GTPase或內(nèi)吞試驗(yàn)中終DMSO的濃度最高分別為3.3 或1%,，但是通常為1%,。動力蛋白I的GTPase試驗(yàn)不會被高達(dá)3.3%的DMSO影響?；衔镆?0mM儲備液在100% DMSO中溶解,。這些儲備溶液可以在?20°C下儲存幾個月。隨后將化合物在20mM Tris–HCl pH?7.4中稀釋到50%DMSO的溶液,，然后再次稀釋到終試驗(yàn)濃度。對于4a抑制的動力學(xué)分析,，動力蛋白I以17nM的終濃度與包含PS (2µg/mL) 和不同數(shù)量GTP (50–250μM)的GTPase緩沖液,，在濃度范圍為0.5 - 6μM 的4a存在下進(jìn)行培養(yǎng)。加入EDTA (0.5mM, pH 7.4)30分鐘后停止反應(yīng),。曲線使用Michaelis–Menten 方程 v = Vmax[S]/(Km + [S])生成,，其中S是GTP底物。Vmax和Km測定后,，數(shù)據(jù)使用Lineweaver–Burke方程,，1/v = 1/Vmax + (Km/Vmax)(1/[S])轉(zhuǎn)化,。測定條件基于動力蛋白I試驗(yàn)，但有所修改,。重組動力蛋白II的使用濃度為50nM,，被10µg/mL PS刺激。終止前,，GTPase反應(yīng)在37°C下進(jìn)行90分鐘,。

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