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預(yù)包被 96 孔微孔板

標(biāo)準(zhǔn)

標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液

洗滌緩沖液

檢測試劑 A

檢測試劑 B

稀釋劑 A

稀釋劑 B

TMB 底物

停止解決方案

封板機(jī)

37°C 培養(yǎng)箱

多通道和單通道移液器以及無菌移液器吸頭

噴瓶或自動洗板機(jī)

1.5 毫升管

蒸餾水

吸收性濾紙

100 ml 和 1 L 量筒

酶標(biāo)儀（波長：450 nm）

ELISA 搖床

血清：樣品應(yīng)收集到血清分離管中。將試管垂直放置,，在 4°C 或室溫下放置長達(dá) 60 分鐘,，使其保持原樣，以凝固血清,。以大約 1000 × g 離心 20 分鐘,。立即或分裝分析血清并儲存在 -20°C 或 -80°C 下。

血漿：使用肝素或 EDTA 作為抗凝劑收集血漿,。收集后 30 分鐘內(nèi)以 1000 × g 離心 15 分鐘,。立即檢測或分裝并儲存在 -20°C 或 -80°C 下。 避免溶血和高膽固醇樣本,。

組織勻漿：組織勻漿的制備會因組織類型而異——這只是一個例子,。用冰冷的 PBS 沖洗組織以去除多余的血液。均質(zhì)化前稱重,。將組織切碎,，用組織勻漿器在 PBS 中的冰上勻漿,，然后對細(xì)胞懸液進(jìn)行超聲處理,。將勻漿以 5000 × g 離心 5 分鐘并收集上清液。立即測定或分裝并儲存在 -20°C 下,。

1） 標(biāo)準(zhǔn)品：用推薦體積的標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑緩沖液制備標(biāo)準(zhǔn)品,，制成標(biāo)準(zhǔn)溶液。然后按照方案中的說明,，使用標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑緩沖液對標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行連續(xù)稀釋,。

2） 洗滌緩沖液：按照實驗步驟中的說明，用蒸餾水稀釋濃縮的洗滌緩沖液,。

3） 檢測試劑制備：計算所需工作溶液的總體積,。分別用稀釋劑 A 和稀釋劑 B 以 1：100 的比例稀釋檢測試劑 A 和檢測試劑 B。

1） 設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)、測試樣品和對照孔,。

2） 將 100 μl 稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品分裝到標(biāo)準(zhǔn)孔中,。

3） 將 100 μl 標(biāo)準(zhǔn)稀釋液緩沖液分裝到對照（零）孔中。

4） 將 100 μl 稀釋樣品分裝到樣品孔中,。在 37 °C 下孵育 1 小時,。

5） 將 100 μl 檢測試劑 A 分裝到每個孔中。在 37 °C 下孵育 1 小時,。

6） 洗滌 3 次,。

7） 將 100 μl 檢測試劑 B 分裝到每個孔中。在 37 °C 下孵育 90 分鐘,。

8） 洗滌 5 次,。

9） 將 90 μl TMB 底物分裝到每個孔中。在 37 °C 下孵育 10-20 分鐘,。

10） 分裝 50 μl 終止液,。

11） 測量 450 nm 處的 OD。