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人淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞(HAL-01)HAL-01細(xì)胞于1990年從一名患有急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL-L2）的17歲女性的外周血中建立,。

【細(xì)胞名稱】人淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞

【細(xì)胞別名】HAL-01;HAL01; HAL-1

【種屬來源】人

【組織來源】B細(xì)胞前體白血病

【細(xì)胞形態(tài)】淋巴細(xì)胞樣

【生長特性】懸浮細(xì)胞

【培養(yǎng)體系】1640+10%FBS+1%P/S

【傳代比例】5×10^5-1×10^6cells/mL，每周換液2-3 次

【培養(yǎng)條件】氣相：95%空氣+5%二氧化碳，溫度：37℃

【凍存條件】凍存液：55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO,；存儲(chǔ)條件：液氮

【安全性】建議在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,，并做好個(gè)人防護(hù),。

【用途】僅供科研使用

二,、復(fù)蘇及傳代方法

1、細(xì)胞株的復(fù)蘇（凍存管）

（1）將凍存管在37℃水浴鍋中迅速全融化,，并適當(dāng)輕輕搖晃促融,。快速,、全融化可以提高細(xì)胞的復(fù)蘇效果,。

（2）打開凍存管前時(shí)用75%酒精擦拭細(xì)胞凍存管外壁。

（3）將全融化的細(xì)胞直接離心,，或者轉(zhuǎn)移至無菌15ml或其它合適無菌離心管中,，400g離心5min，吸除上清,，注意不要吸走細(xì)胞沉淀,，然后用新鮮*全培養(yǎng)液重懸后轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)器皿，混勻,，置于CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng),。

（4）第二天視貼壁或生長狀態(tài)，更換培養(yǎng)液,。

注意：如果收到的凍存管不能及時(shí)進(jìn)行復(fù)蘇,，還請(qǐng)置于-80℃或液氮中進(jìn)行暫存，并盡快復(fù)蘇進(jìn)行培養(yǎng),。

2,、細(xì)胞株的復(fù)蘇（T25瓶）

（1）將收到T25瓶脫外包后用75%酒精擦拭瓶外壁。

（2）置于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),，看是否有異常,；無異常后，采用移液器移去多余的培養(yǎng)液,，置于CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)過夜,。

（3）第二天視貼壁或生長狀態(tài)，考慮進(jìn)行換液或傳代,，傳代比例參考1:2~1:4,。

三、注意事項(xiàng)

1,、每支凍存管約含1×106個(gè)細(xì)胞,，體積為1ml，預(yù)期存活率60-90%，建議復(fù)蘇至1個(gè)T25瓶或1個(gè)6cm培養(yǎng)皿中,。如果復(fù)蘇后存活率較低,，可以消化后轉(zhuǎn)移至3.5cm培養(yǎng)皿/T12.5瓶中，這樣細(xì)胞生長會(huì)更好,。

2,、如果本產(chǎn)品是常溫運(yùn)輸，并且是培養(yǎng)瓶中充滿*全培養(yǎng)液的貼壁細(xì)胞,，收到細(xì)胞后：

（1）及時(shí)拍照記錄有無漏液/瓶身破損現(xiàn)象,。

（2）用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),。先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2~4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。

（3）仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,，了解細(xì)胞相關(guān)信息。

（4）靜置完成后,，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢、拍照,，記錄細(xì)胞狀態(tài),。

3、如果細(xì)胞密度超過85%請(qǐng)盡快進(jìn)行傳代操作,；如果懸浮的細(xì)胞較多,，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)箱中靜置過夜以使懸浮的細(xì)胞再次貼壁。如果收到的是常溫運(yùn)輸?shù)碾x心管裝的懸浮細(xì)胞,，可以直接取出轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),。若培養(yǎng)液顏色正常則保留培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，并且在*次更換培養(yǎng)液時(shí),，保留一半原培養(yǎng)液,，并加入一半新鮮培養(yǎng)液，這樣可以盡量避免由于培養(yǎng)液或血清差異導(dǎo)致細(xì)胞生長的不適應(yīng),，確保細(xì)胞良好的生長狀態(tài),。

4、細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)?jiān)谏锇踩衽_(tái)中進(jìn)行操作,，并嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作,。

上海牧榮生物科技有限公司

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