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PepMute™ siRNA Transfection Reagent  產(chǎn)品型號：SL100566

pep mute siRNA轉(zhuǎn)染劑由模擬病毒細胞穿透肽(CPPs)配制而成,，是一種全新的siRNA遞送工具，在各種哺乳動物細胞中,，1 nM siRNA下的沉默效率超過95%. 利用我們專有的肽模擬技術(shù)(PST ),數(shù)百種病毒CPP被模擬,、合成，并在各種哺乳動物細胞中篩選基因遞送功效(圖1),。PepMute試劑隨后被鑒定和驗證為濃縮和轉(zhuǎn)染短(100 bp以下)單鏈或雙鏈核酸的特別有效的載體是這樣的作為siRNA,，miRNA模擬物和DNA寡聚物廣泛應(yīng)用于哺乳動物細胞,。


圖一。一部表現(xiàn)侏儒的卡通片siRNA轉(zhuǎn)染試劑由PST開發(fā)

尺寸:
- PepMute試劑,，1.0 mL，足以用于約1,，333個反應(yīng),，基于在24孔板中轉(zhuǎn)染0.5~5.0 pmol siRNA或miRNA模擬物
-活力Mute轉(zhuǎn)染緩沖液(5x),， 針對最大轉(zhuǎn)染效率配制8.0毫升5x濃縮儲備液,，制成40毫升工作溶液

應(yīng)用:
- siRNA miRNA模擬物或mRNA轉(zhuǎn)染
- DNA/siRNA共轉(zhuǎn)染
- DNA寡核苷酸轉(zhuǎn)染

存儲:
在4°C下儲存,，用于胃蛋白酶抑制劑PepMute轉(zhuǎn)染緩沖液的試劑和RT(5倍)。如果儲存得當,，該產(chǎn)品可穩(wěn)定儲存12個月或更長時間,。

優(yōu)勢:
-在最終的1.0納米siRNA下具有出色的靜音性能
-多種細胞中超過95%的基因沉默
-一管反應(yīng),，簡單的標準方案
-與血清和抗生素相容
-適用于HTS的協(xié)議
-極低的細胞毒性
-非常實惠

PepMute siRNA轉(zhuǎn)染劑和品牌產(chǎn)品之間的功效比較

圖二,。在HEK293細胞中，使用1.0升PepMu,，可以很好地沉默內(nèi)源性表達的KIF11(也稱為EG5)24孔板的每個孔中含有te試劑和0.5皮摩爾EG5 siRNA。 KIF11(也稱為EG5)編碼 一種運動蛋白,，屬于 驅(qū)動蛋白樣蛋白家族參與細胞有絲分裂期間染色體定位和雙極紡錘體形成。KIF11水平的降低導致有絲分裂停滯,。PepMute試劑有效地將EG5 siRNA(最終1.0 nM)遞送至HEK293細胞,，導致轉(zhuǎn)染后48小時HEK293細胞的“聚集"表型超過陰性對照(使用假EG5 siRNA的最終1.0 nM)的80%，同時優(yōu)于siRNA轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine RNAi max(RNAi max,，1.0nM EG5 siRNA)/INTERFERin(1.0nM EG5 siRNA)/Dharmafect(10.0nM EG5 siRNA)和jetPRIME (20 nM EG5 siRNA)轉(zhuǎn)染后48小時,，用尼康顯微鏡觀察(上圖)并定量(下圖)293細胞的表型。


圖3,。PepMute轉(zhuǎn)染劑(上圖)與Dharmafect 4(中圖)和Lipofectamin的沉默效率比較eA549細胞上的RNAiMAX (RNAiMAX,，下圖)siRNA轉(zhuǎn)染試劑。按照制造商的方案,，通過上述三種轉(zhuǎn)染試劑,，將靶向0.5-20nm不同終濃度的海腎螢光素酶的siRNA與海腎螢光素酶基因(每孔0.5g pRL-CMV DNA)共轉(zhuǎn)染到生長在24孔板中的A549細胞中。 用海腎螢光素酶測定系統(tǒng)(Promega)在共轉(zhuǎn)染后36小時測定海腎螢光素酶活性,。發(fā)光瓦用光度計(Beckman Coulter LD 400)在10s積分期間從5.0 l裂解物中測量。熒光素酶活性表示為10秒內(nèi)積分的光單位(RLU ),并標準化為每毫克通過BCA分析來檢測細胞蛋白。誤差條代表從三次實驗中得出的標準偏差,。熒光素酶相對于未處理的細胞計算硒沉默效率。在…期間PepMute和Dharmafect 4試劑從1.0 nM的海腎螢光素酶siRNA中產(chǎn)生顯著的基因沉默,，lipofectamine RNAiMAX僅在20 nM后產(chǎn)生良好的敲除,，而在低濃度siRNA(分別為0.5和1.0 nM)下觀察到增強的基因表達。



圖4,。PepMute轉(zhuǎn)染試劑通過分別反向轉(zhuǎn)染5.0和1.0 nM GFP siRNA,，敲低了MCF7細胞(上圖)和U2OS細胞(下圖)中穩(wěn)定的GFP表達。 綠色熒光蛋白在MCF7和U2OS細胞中穩(wěn)定表達。將靶向GFP基因的siRNA(右圖)和假siRNA(左圖)分別以最終的5.0和1.0 nM導入MCF7和U2OS細胞 使用PepMute轉(zhuǎn)染試劑進行反向轉(zhuǎn)染,。綠色熒光蛋白通過尼康熒光顯微鏡在轉(zhuǎn)染后48小時監(jiān)測基因沉默,。定量分析表明由pep mute siRNA轉(zhuǎn)染劑遞送的5.0和1.0 nM的GFP siRNA分別敲除MCF7和U2OS細胞中90%和95%穩(wěn)定表達的GFP。

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PepMute™ siRNA Transfection Reagent  產(chǎn)品型號：SL100566