MagVigen™ – Poly T mRNA Select
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mag vigen mRNA選擇納米顆粒是信使RNA純化的理想選擇,。mag vigen mRNA選擇納米顆粒可從總RNA中高效回收聚腺苷酸尾信使RNA,。短時(shí)間孵育后,，mRNA被MagVigen mRNA選擇納米顆粒捕獲。產(chǎn)生的納米顆粒-聚(A) mRNA復(fù)合物可以用磁鐵從樣品的其余部分中分離出來(lái),。保留的mRNA材料可以從納米顆粒上切割下來(lái),，用于產(chǎn)生測(cè)序文庫(kù)。
mag vigen mRNA選擇納米顆粒能夠從總RNA中純化poly(A) mRNA。它們可用于逆轉(zhuǎn)錄,、RNA探針和RNA文庫(kù)構(gòu)建,。純化的mRNA產(chǎn)物可以通過(guò)凝膠電泳、PCR定量和測(cè)序進(jìn)一步分析,。
產(chǎn)品內(nèi)容
:
- cat # 61004:MagVigen mRNA選擇納米顆粒
3毫升,，1毫克/毫升,，結(jié)合能力高達(dá)10-20微克mRNA，或高達(dá)300皮摩爾熒光團(tuán)標(biāo)記的聚A26 每毫升,。
Cat# K61004還包括:
- 成塊緩沖區(qū)
- 結(jié)合緩沖液
- 洗滌緩沖液
- 洗脫緩沖液
所有材料應(yīng)儲(chǔ)存在4°c下,。
保質(zhì)期:6個(gè)月
所需材料
- 去離子水。
注意:
有效捕獲mRNA所需的納米顆粒的量取決于起始材料中多聚(A)尾mRNA的濃度,。
通常,，每100μg總RNA使用100μl MagVigen mRNA選擇納米顆粒。
重要提示:使用前一定要重新懸浮納米顆粒,。
mRNA捕獲協(xié)議
結(jié)合mRNA
- 從儲(chǔ)存中取出MagVigen mRNA選擇納米顆粒,，并將其置于室溫。
- 使用前,，渦旋MagVigen DNA Select納米顆粒10秒鐘。
注意: 確保珠子全重新懸浮并充分分散,。
- 取出100μl MagVigen mRNA選擇納米顆粒,，放入干凈的1.5ml微量離心管中,。
- 使用磁性架收集mag vigen mRNA選擇納米顆粒,，棄去上清液。
注意: 在微量離心管的側(cè)面應(yīng)該可以看到含有深棕色納米顆粒的透明沉淀物,。
- 將納米顆粒重新懸浮在200μl封閉緩沖液中,，并在室溫下孵育10分鐘,。
- 使用磁性架收集mag vigen mRNA選擇納米顆粒,，棄去上清液,。
- 將納米顆粒重新懸浮在200μl結(jié)合緩沖液中,。
- 向mag vigen mRNA選擇納米顆粒中添加RNA樣品。
- 渦旋或吸取反應(yīng)溶液，以充分混合,。
注意: 在捕獲反應(yīng)期間不引入氣泡是理想的,。
- 在室溫下孵育MagVigen mRNA選擇納米顆粒-RNA反應(yīng)30分鐘,。
- 孵育后,，使用磁鐵架從溶液中分離捕獲mRNA的納米顆粒,。
- 用移液管小心移去上清液,，確保不要干擾捕獲mRNA的納米顆粒沉淀。
洗滌mRNA
- 將納米顆粒重新懸浮在200μl洗滌緩沖液中,，并在室溫下放置2分鐘,。
- 使用磁鐵架將捕獲mRNA的納米顆粒從洗滌液中分離出來(lái)。小心取出并丟棄上清液,。,。
- 重復(fù)步驟13-14,，總共進(jìn)行兩次清洗。
洗脫mRNA
- 通過(guò)添加20μl洗脫緩沖液,，從納米顆粒中洗脫捕獲的mRNA。
注意: 可以根據(jù)需要調(diào)節(jié)洗脫緩沖液的體積,。
- 輕輕吸移至混合均勻,，并在室溫下孵育5分鐘,。
注意: 理想的是在洗脫反應(yīng)過(guò)程中不引入氣泡。
- 旋轉(zhuǎn)幾秒鐘以收集溶液,。
- 將試管放在磁性架上1分鐘,，以將納米顆粒與洗脫的mRNA分離。
- 將含有mRNA產(chǎn)物的上清液轉(zhuǎn)移到干凈的試管中,。確保不要弄亂顆粒,。純化的mRNA現(xiàn)在準(zhǔn)備用于隨后的評(píng)估。
MagVigen™ – Poly T mRNA Select
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