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多糖多酚植物DNA提取試劑盒

適用范圍:多糖多酚植物 DNA 提取

試劑盒組分：

Buffer CA 100ml*2

Buffer FC 100ml*3

Buffer GW 33ml*2

Buffer GE 20ml吸附柱 200 個

保存條件：Buffer GE 4°C其它組分室溫保存

產品說明本試劑盒采用高效,、專一結合核酸的離心吸附柱和*特的緩沖系統(tǒng),，適合從各種不同的新鮮或凍存植物組織中提取基因組 DNA,，并可最大限度去除植物組織中的雜質,。本試劑盒無需使用酚/氯仿抽提,，操作安全,。提取的基因組 DNA 片段大,、純度高、質量穩(wěn)定可靠,，適用于 PCR,、熒光定量 PCR、分子標記、文庫構建等實驗,。

自備試劑：無水乙醇

實驗前準備及重要注意事項1．樣品應避免反復凍融,，否則會導致提取的 DNA 片段較小且提取量下降。2．第一次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在 Buffer GW 中加入無水乙醇,。使用前請檢查 Buffer CA是否出現(xiàn)結晶或者沉淀,，如有結晶或者沉淀，請將 Buffer CA置于 65℃水浴重新溶解,。操作步驟1．取植物新鮮組織 50-200mg 左右,，加入液氮充分研磨。2．將研磨后的粉末收集到離心管（自備）中,，加入 1ml Buffer CA,，渦旋振蕩 1 分鐘，65℃水浴 30 分鐘,，期間顛倒幾次,，使其充分裂解。3．將離心管轉入離心機中 13,000×g 室溫離心 3 分鐘,。4．小心吸取 800ul 上清到一個新的 2ml 離心管（自備）,，加入等體積的酚：氯仿：異戊醇=25：24：1 的混合液，渦旋振蕩 1min,，室溫放置 5min,。5. 13,000×g 離心 3 分鐘，小心吸取上清到一個 2ml 離心管（自備）,，注意不要吸到界面物質,。6．加入 2 倍體積的 Buffer FC，充分混勻（如 450ul 濾液加入 900ul Buffer FC）,。注意：加入 Buffer FC 后應立即混勻,，可能會產生沉淀但不影響后續(xù)實驗。7．將上步所得溶液和沉淀全部加入到已裝入收集管的吸附柱中,，若一次不能加完溶液,，可分多次轉入。13,000×g 離心 1 分鐘,，倒掉收集管中的廢液,，將吸附柱重新放回收集管中。8．向吸附柱中加入 500ul Buffer GW（使用前檢查是否已加入無水乙醇）,，13,000×g離心 1 分鐘,，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中,。注意：如吸附膜呈現(xiàn)綠色,，向吸附柱中加入 500ul 無水乙醇,，13,000×g 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的廢液,，將吸附柱重新放回收集管中,。9．重復步驟 8。10．13,000×g 離心 2 分鐘,，倒掉收集管中的廢液,。將吸附柱置于室溫數(shù)分鐘，晾干,。注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除,，乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶促反應（酶切、PCR 等）,。11. 將吸附柱放到一個新離心管（自備）中,，向吸附膜的中間部位懸空滴加入 50ulBuffer GE 或滅菌水，室溫放置 2-5 分鐘,，13,000×g 離心 1 分鐘,，收集 DNA 溶液。-20℃保存 DNA,。注意：1）如果下游實驗對 pH 值或 EDTA 敏感,，可以用滅菌水洗脫。洗脫液的 pH值對洗脫效率有很大影響,，若用水做洗脫液應保證其 pH 值在 7.0-8.5（可以用 NaOH將水的 pH 值調到此范圍）,，pH 值低于 7.0 時洗脫效率不高。2）離心之前室溫孵育 5 分鐘可以增加產量,。3）如果要提高 DNA 的終濃度,，可以將步驟 10 所得的 DNA 洗脫液重新加至吸附膜上，重復步驟 10,；4）因為保存在水中的DNA會受到酸性水解作用的影響,，如需長期保存，推薦用BufferGE 洗脫并于-20℃保存,。

本產品僅供科研使用,，請勿用于臨床診斷及其他用途

上海牧榮生物科技有限公司

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