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淀粉含量測試盒

微量法 100管/96樣

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

淀粉是植物中糖的主要儲存形式,，其含量測定對于評價食品營養(yǎng)價值和調(diào)查植物體內(nèi)糖代謝都有重要意義,。

測定原理：

利用80％乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開，進(jìn)一步采用酸水解法分解淀粉為葡萄糖,，采用蒽酮比色法測定葡萄糖含量,，即可計算淀粉含量。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀,、水浴鍋,、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板,、研缽,、冰、濃硫酸（不允許快遞）和蒸餾水,。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體100mL×1瓶,，4℃保存；

試劑二：液體105mL×1瓶,，4℃保存,；

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存,；

淀粉提?。?/p>

1. 稱取0.1~0.2g新鮮樣本（建議稱取約0.1g新鮮樣本）于研缽中研碎，加入1mL試劑一,，充分勻漿后轉(zhuǎn)移到EP管中,，80℃水浴提取30min，3000g,，25℃離心5min,，棄上清，留沉淀,。

2. 沉淀中加入0.5mL蒸餾水,，放入95℃水浴中糊化15min（蓋緊，以防止水分散失）,。

3. 冷卻后,，加入0.35mL試劑二，25℃常溫提取15min,，振蕩3-5次,。

4. 加入0.85mL蒸餾水,，混勻，3000g,，25℃離心10min,，取上清液待測。

注意：如樣本為淀粉含量較高的干樣,，為保證充分提取,，可適當(dāng)減小取樣量，如稱取0.01g~0.02g干樣,，加入1mL試劑一,，其余提取步驟同上。

測定步驟：

1. 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至620nm,，蒸餾水調(diào)零。

2. 調(diào)節(jié)水浴鍋至95度,。

3,、工作液的配制：臨用前在試劑三中加入3.75mL蒸餾水后，緩慢加入21.25mL濃硫酸,，不斷攪拌,，充分溶解，待用,；用不完的試劑4℃保存一周,；

4、樣本測定：取50μL樣本和250μL工作液至EP管中,，95度水浴10 min（蓋緊,，防止水分散失），自然冷卻至室溫,，取200uL至微量石英比色皿或96孔板中,，在620 nm 波長下記錄測定吸光度值A(chǔ)。

淀粉含量計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 5.872x - 0.0295,；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL）,，y為吸光值。

1,、按照蛋白濃度計算

淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷5.872 ÷(V1×Cpr)=0.17×(A+0.0295) ÷Cpr

2、按樣本鮮重計算

淀粉含量(mg/g 鮮重)= [(A+0.0295)×V1] ÷5.872÷(W×V1÷V2) =0.289×(A+0.0295) ÷W

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積,，0.05mL,；V2：加入提取液體積，1.7 mL,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量，g

b.用96孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 2.936x - 0.0295,；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL）,，y為吸光值。

1,、按照蛋白濃度計算

淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷2.936 ÷(V1×Cpr)=0.34×(A+0.0295) ÷Cpr

2,、按樣本鮮重計算

淀粉含量(mg/g 鮮重)=[(A+0.0295)×V1]÷2.936÷(W×V1÷V2) =0.578×(A+0.0295) ÷W

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.05mL,；V2：加入提取液體積,，1.7 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量,，g

注意：由于工作液具有強(qiáng)腐蝕性,，請謹(jǐn)慎操作。

若吸光值大于1,，請將樣本用提取液稀釋后再測定,，計算公式中乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。

提取液的配置：0.35mL試劑二+1.35mL水。用多少按照此比例配多少,。

*低檢測限為10μg/g鮮重或100ng/mgprot,。

上海牧榮生物科技有限公司

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