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組織無機(jī)磷含量測(cè)試盒

微量法 100T/96S

注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定,。

測(cè)定意義：

無機(jī)磷主要指磷酸根,，參與生物體內(nèi)多種代謝,，包括能量代謝,、核酸代謝、蛋白質(zhì)磷酸化和脫磷酸化等等,，此外促進(jìn)碳水化合物的合成,、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)運(yùn)。

測(cè)定原理：

鉬藍(lán)與磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物質(zhì),，通過測(cè)定660nm光吸收,，即可計(jì)算無機(jī)磷含量。

自備儀器和用品：

離心機(jī),、水浴鍋,、可調(diào)式移液槍、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、微量石英比色皿/96孔板,、和蒸餾水。

試劑組成和配置：

試劑一：液體100mL×1瓶,，4℃保存,。

試劑二：液體5mL×1瓶，4℃保存,。

試劑三：粉劑×1瓶,，4℃避光保存。臨用前配制,，加入10 mL蒸餾水,，充分溶解后加入試劑二（全部），混勻,。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支,。

無機(jī)磷提取：

按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿,。10000rpm，4℃離心10min,，取上清,，置冰上待測(cè)。

測(cè)定：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到660 nm,，蒸餾水調(diào)零。

2.打開水浴鍋,，調(diào)節(jié)溫度到40℃,。

3. 空白管：取0.5mL EP管,，依次加入100μL蒸餾水，100μL試劑三,，混勻后置于40℃水浴保溫10min,，室溫冷卻10 min后于660 nm測(cè)定吸光度，記為A空白管,。

4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取0.5mL EP管,，依次加入10μL標(biāo)準(zhǔn)液，90μL蒸餾水,，100μL試劑三,，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測(cè)定吸光度,，記為A標(biāo)準(zhǔn)管,。

5. 測(cè)定管：取0.5mL EP管，依次加入10μL上清液,，90μL蒸餾水，100μL試劑三,，混勻后置于40℃水浴保溫10min,，室溫冷卻10 min后于660 nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管,。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次,。

組織無機(jī)磷含量計(jì)算：

1. 按照蛋白含量計(jì)算

無機(jī)磷含量(μmol/mg prot)= [C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×V總÷Cpr

=1×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)÷Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

無機(jī)磷含量(μmol/g 鮮重 )= [C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×V總÷W

=1×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)÷W

C標(biāo)準(zhǔn)液：1mmol/L；V總：上清液總體積,，1mL=0.001 L,；W：樣品質(zhì)量，g,。

注意事項(xiàng)：

1. 試劑三需臨用前配制,，并且當(dāng)天使用完畢。

2. 40min內(nèi)完成比色,。

3. *低檢出限為10μmol/L,。

上海牧榮生物科技有限公司

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