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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產業(yè),農林牧漁,制藥/生物制藥 |
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細胞壁不溶性酸性轉化酶（BAI）測試盒
微量法 100管/48樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
蔗糖轉化酶（Invertase,，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代謝關鍵酶之一,。根據(jù)最適 pH,，Ivr分為酸性轉化酶（AI）和中性轉化酶（NI）兩種類型。
AI的最適pH為3～5,。AI分為可溶性AI(S-AI)和細胞壁不溶性AI（B-AI）兩種類型,。B-AI存在于細胞間隙并結合在細胞壁上，主要參與韌皮部質外體卸載時蔗糖的分解,，以維持庫源之間蔗糖的濃度,。
測定原理：
B-AI催化蔗糖降解產生還原糖，進一步與3,5－二硝基水楊酸反應,，生成棕紅色氨基化合物,，在510nm有特征光吸收，在一定范圍內510nm光吸收增加速率與B-AI活性成正比,。
自備用品：
可見分光光度計/酶標儀,、臺式離心機、水浴鍋,、可調式移液器,、微量石英比色皿/96孔板,、研缽,、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液1：液體100mL×1瓶,，4℃保存;
提取液2：液體100mL×1瓶,，4℃保存;
試劑一：液體20mL×1瓶,，4℃保存;
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存,；臨用前加入10mL試劑一充分溶解備用,；用不完的試劑4℃保存;
試劑三：液體15mL×1瓶，4℃保存,；
粗酶液提?。?/p>
按照組織質量（g）：提取液1體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液1）,，進行冰浴勻漿,。12000g 4℃離心10min，棄上清,，沉淀中加入1mL蒸餾水,，充分震蕩混勻，12000g 4℃離心10min,，棄上清,，沉淀中加入1mL提取液2 充分混勻，4℃浸提過夜,，12000g 4℃離心20min,，取上清置冰上待測。
測定步驟和加樣表：
分光光度計或酶標儀預熱30min以上,，調節(jié)波長至510nm,，蒸餾水調零。
2,、樣本測定,，（在EP管中依次加入下列試劑）：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 |
樣本 | 50 | 50 |
試劑一 | 200 | |
試劑二 | 200 |
混勻， 37℃準確水浴30min后,，95℃水浴10min（蓋緊,，以防水分散失），流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變）
試劑三 | 125 | 125 |
混勻,，95℃水浴10min（蓋緊,，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻,，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,， 510nm處記錄各管吸光值A，如果吸光值大于2,，可以用蒸餾水稀釋后測定(計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)),，ΔA=A測定-A對照。每個測定管設一個對照管,。
B-AI活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0016x -0.001,；x為標準品濃度（μg/mL）,，y為吸光值。
（1）按蛋白濃度計算：
單位的定義：37℃每mg蛋白每分鐘產生1μg還原糖定義為一個酶活性單位,。
B-AI活性（μg /min/mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr
（2）按鮮重計算：
單位的定義：37℃每g組織每分鐘產生1μg還原糖定義為一個酶活性單位,。
B-AI活性（μg /min /g鮮重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷W
V1：加入反應體系中樣本體積，0.05mL,；V2：加入提取液體積,，1mL；T：反應時間,，30min,； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL,；W：樣本鮮重,，g。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0008x -0.001,；x為標準品濃度（μg/mL）,，y為吸光值。
（1）按蛋白濃度計算：
單位的定義：37℃每mg蛋白每分鐘產生1μg還原糖定義為一個酶活性單位,。
B-AI活性（μg /min /mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=41.6×(ΔA +0.001) ÷Cpr
（2）按鮮重計算：
單位的定義：37℃每g組織每分鐘產生1μg還原糖定義為一個酶活性單位,。
B-AI活性（μg /min /g鮮重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =41.6×(ΔA +0.001) ÷W
V1：加入反應體系中樣本體積，0.05mL,；V2：加入提取液體積,，1mL；T：反應時間,，30min,； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL,；W：樣本鮮重,，g。
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