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維生素E測試盒
微量法100T/48S
測定意義
維生素E（Vitamin E）是一種脂溶性維生素,，其水解產(chǎn)物為生育酚,，是生物體中最主要的抗氧化劑之一,，能阻止不飽和脂肪酸收到過氧化作用的損傷,，維持不飽和脂肪酸細胞膜的完整性和正常功能，具有延緩衰老,、預(yù)防溶血性貧血作用,，在醫(yī)藥、化妝品,、保健品,、食品行業(yè)具有較高的應(yīng)用價值。
測定原理
VE還原Fe3+為Fe2+,，F(xiàn)e2+與1,10-菲羅啉產(chǎn)生有色絡(luò)合物,，在530nm有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平,、研缽,、離心機、可見分光光度計/酶標儀,、微量石英比色皿/96孔板,、漩渦震蕩儀。
試劑組成和配制
提取液：液體100mL×1瓶,，4℃保存,。
試劑一：液體2mL×1瓶，4℃避光保存,。
試劑二：液體2mL×1支,，4℃保存,。
試劑三：液體2mL×1支,，4℃保存。
試劑四：液體6mL×1瓶,，4℃保存,。
樣本處理
組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液,，勻漿后用提取液定至1mL,，定至在漩渦混勻儀上震蕩5min，于25℃,，5000g離心10min,，取上層測定。
細胞：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液）,，冰浴超聲波破碎細胞（功率300w,，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）后在漩渦混勻儀上震蕩5min,，于25℃,，5000g離心10min，取上層測定,。
血清：取0.1mL,，加0.9mL提取液，漩渦儀混勻上震蕩5min,，于25℃,，5000g離心10min，取上層測定,。
測定操作
對照管 | 測定管 | |
樣品（μL） | 100 | 100 |
試劑一（μL） | 20 | 20 |
試劑二（μL） | 20 | |
試劑三（μL） | 20 | |
充分混勻,，25℃反應(yīng)5min | ||
試劑四（μL） | 60 | 60 |
充分混勻，于微量石英比色皿/96孔板,，無水乙醇調(diào)零,，測定530nm處吸光值，記為A對照管和A測定管,，△A=A測定管-A對照管,。 | ||
計算公式
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y = 0.22x + 0.0065 R2 = 0.9978
1. 按照蛋白含量計算
VE含量（μg/mg prot）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V反總÷（V樣×Cpr）
= 9.09×（△A -0.0065）÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計算
VE含量（μg/g）= （△A -0.0065）÷ 0.22×V反總÷（V樣×W÷V樣總）
= 9.09×（△A -0.0065）÷ W
3. 按照細胞數(shù)量計算
VE含量（μg/104 cell）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V反總÷（V樣×細胞數(shù)量÷V樣總）
= 9.09×（△A -0.0065）÷ 細胞數(shù)量
4. 按照液體體積計算
VE含量（μg/mL）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V反總÷V樣×10
= 90.9×（△A -0.0065）
V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL,；V樣：加入樣本體積,，0.1mL；V樣總：加入提取液體積,，1mL,；Cpr：蛋白濃度，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量,，g
用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y = 0.11x + 0.0065 R2 = 0.9978
1. 按照蛋白含量計算
VE含量（μg/mg prot）=（△A -0.0065）÷ 0.11×V反總÷（V樣×Cpr）
= 18.18×（△A -0.0065）÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計算
VE含量（μg/g）= （△A -0.0065）÷0.11×V反總÷（V樣×W÷V樣總）
= 18.18×（△A -0.0065）÷ W
3. 按照細胞數(shù)量計算
VE含量（μg/104 cell）=（△A -0.0065）÷ 0.11×V反總÷（V樣×細胞數(shù)量÷V樣總）
= 18.18×（△A -0.0065）÷ 細胞數(shù)量
4. 按照液體體積計算
VE含量（μg/mL）=（△A -0.0065）÷0.11×V反總÷V樣×10
= 181.8×（△A -0.0065）
V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL,；V樣：加入樣本體積,，0.1mL；V樣總：加入提取液體積,，1mL,；Cpr：蛋白濃度，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量,，g
注意事項
若反應(yīng)體系產(chǎn)生沉淀，需要將樣品進行適當?shù)南♂?，并在計算公式中乘以稀釋倍?shù),。
上海牧榮生物科技有限公司
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