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高鐵還原酶（FCR）測試盒

微量法 100管/96樣

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

高鐵還原酶（ferric-chelate reductase, FCR）催化高價鐵螯合物中的Fe3+還原為Fe2+,，在部分物種鐵元素的吸收中有重要作用。

測定原理：

FCR催化Fe3+還原為Fe2+,，F(xiàn)e2+和ferrozine反應(yīng)顯色,，在562nm下有特征吸光值。

自備用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀,、臺式離心機,、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板,、研缽,、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體6mL×1瓶,，4℃避光保存;

試劑二：液體6mL×1瓶,，4℃避光保存;

試劑三：液體6mL×1瓶，4℃保存,。

粗酶液提?。?/strong>

按照組織質(zhì)量（g）：水（mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL蒸餾水）,，進行冰浴勻漿,。10000g 4℃離心10min，取上清,，置冰上待測,。

測定步驟：

1. 分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至562nm，蒸餾水調(diào)零,。

2. 工作液配制：將試劑一,、二、三以1:1:1的比例混合,。臨用前配制,，用多少配多少。

3. 在微量石英比色皿/96孔板中,，加入50μL樣本上清和150μL工作液,，混勻，記錄初始吸光值A(chǔ)1和30min后的吸光值A(chǔ)2,。ΔA=A2-A1,。

FCR活性計算:

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 8.0014x + 0.0011，R2 = 0.9997,；

1. 按樣本質(zhì)量計算

單位定義：每g樣本每分鐘產(chǎn)生1nmolFe2+-ferrozine定義為一個酶活力單位,。

FCR（nmol/min/g 鮮重）=（△A-0.0011）÷ 8.0014×1000×V標(biāo)÷(V樣÷V樣總×W)÷T

                       = 4.166×（△A-0.0011）÷W

2. 按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmolFe2+-ferrozine定義為一個酶活力單位,。

FCR（nmol/min/mg prot）=（△A-0.0011）÷8.0014×1000×V標(biāo)÷(V樣÷V樣總×Cpr)÷T

                        =4.166×（△A-0.0011）÷Cpr

V樣總：加入提取液體積,，1 mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積,，50μL,；V標(biāo)：加入標(biāo)準(zhǔn)品體積 ，50μL,；T：反應(yīng)時間,，30min；W：樣品質(zhì)量,，g,；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL,；1000,，μmol到nmol的轉(zhuǎn)換系數(shù)。

b.用96孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 4.0007x + 0.0011,，R2 = 0.9997,；y，吸光度

1. 按樣本質(zhì)量計算

單位定義：每g樣本每分鐘產(chǎn)生1nmolFe2+-ferrozine定義為一個酶活力單位,。

FCR（nmol/min/g 鮮重）=（△A-0.0011）÷4.0007×1000×V標(biāo)÷(V樣÷V樣總×W)÷T

                        =8.331×（△A-0.0011）÷W

2. 按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmolFe2+-ferrozine定義為一個酶活力單位,。

FCR（nmol/min/mg prot）=（△A-0.0011）÷4.0007×1000×V標(biāo)÷(V樣÷V樣總×W)÷T

                        =8.331×（△A-0.0011）÷Cpr

V樣總：加入提取液體積,，1 mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，50μL,；V標(biāo)：加入標(biāo)準(zhǔn)品體積 ，50μL,；T：反應(yīng)時間,，30min,；W：樣品質(zhì)量，g,；Cpr：樣本蛋白濃度,，mg/mL,；1000，μmol到nmol的轉(zhuǎn)換系數(shù),。

上海牧榮生物科技有限公司

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