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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產業(yè),農林牧漁,制藥/生物制藥 |
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谷氨酰胺合成酶（GS)測試盒
微量法 100管/48樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義
GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中,，是生物體內氨同化的關鍵酶之一，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺,，不僅可以防止過多的銨離子對生物有毒性,，而且谷氨酰胺也是氨的主要儲存和運輸形式。
測定原理
GS在ATP和Mg2+存在下,，催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺,；谷氨酰胺進一步轉化為γ─谷氨酰基異羥肟酸,，在酸性條件下與鐵形成的絡合物在540nm處有最大吸收峰,，可用分光光度計測定。
所需的儀器和用品
可見分光光度計/酶標儀,、水浴鍋、臺式離心機,、可調式移液器,、微量石英比色皿/96孔板、研缽,、冰和蒸餾水,。
試劑的組成和配制
提取液：100mL×1瓶，4℃保存,。
試劑一：10mL×1瓶,，-20℃保存；臨用前37℃預熱20min,，充分混勻,，如有沉淀，靜置10min,，取上清待用,。
試劑二：10mL×1瓶，-20℃保存,；臨用前37℃預熱20min,，充分混勻,，如有沉淀，靜置10min,，取上清待用,。
試劑三：粉劑×2瓶，-20℃保存,。用時每瓶加入5mL蒸餾水充分溶解待用,。
試劑四：15mL×1瓶，4℃保存,。
樣本測定的準備
1,、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內,，離心后棄上清,；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴,，功率20％或200W,，超聲3s，間隔10s,，重復30次）,；8000g 4℃離心10min，取上清,，置冰上待測,。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）,，進行冰浴勻漿,。8000g 4℃離心10min，取上清,，置冰上待測,。
2、血清（漿）樣品：直接檢測,。
測定步驟
分光光度計或酶標儀預熱30min以上,，調節(jié)波長至540nm，蒸餾水調零,。
在EP管中加入下列試劑：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 |
試劑一 | 160 | |
試劑二 | 160 | |
試劑三 | 70 | 70 |
樣本 | 70 | 70 |
混勻,，37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）準確水浴30min
試劑四 | 100 | 100 |
混勻，25℃室溫靜置10min后,，8000g,，25℃離心10min，取200μL上清液至微量石英比色皿或96孔板中,，測定540nm處的吸光值A,?！鰽=A測定管-A對照管。每個測定管需設一個對照管,。
GS活力單位的計算
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y = 0.8348x + 0.0008,，R2 = 0.9999
1、血清（漿）GS活性
單位定義：每mL血清（漿）在每mL反應體系中每小時產生1μmol γ-谷氨?；惲u肟酸定義為一個酶活力單位,。
計算公式：
GS（μmol/h/mL）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反總÷V樣÷T
=10.268×ΔA
2、組織,、細菌或細胞GS活性
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白在每mL反應體系中每小時產生1μmol γ-谷氨?；惲u肟酸定義為一個酶活力單位。
GS（μmol/h/mg prot）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反總÷(Cpr×V樣)÷T
=10.268×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織在每mL反應體系中每小時產生1μmol γ-谷氨?；惲u肟酸定義為一個酶活力單位,。
GS（μmol/h/g 鮮重）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷T
=10.268×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算
單位定義：每1萬個細菌或細胞在每mL反應體系中每小時產生1μmol γ-谷氨酰基異羥肟酸定義為一個酶活力單位,。
GS（μmol/h//104 cell）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.021×ΔA
V反總：反應體系總體積,，0.3mL； V樣：加入樣本體積,，0.07mL,；V樣總：加入提取液體積，1 mL,；T：反應時間,，30 min；Cpr：樣本蛋白質濃度,，mg/mL,；W：樣本質量，g,；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬,。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y = 0.4174x + 0.0008,，R2 = 0.9999
1、血清（漿）GS活性
單位定義：每mL血清（漿）在每mL反應體系中每小時產生1μmol γ-谷氨?；惲u肟酸定義為一個酶活力單位,。
計算公式：
GS（μmol/h/mL）=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V反總÷V樣÷T
=20.535×ΔA
2、組織,、細菌或細胞GS活性
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白在每mL反應體系中每小時產生1μmol γ-谷氨?；惲u肟酸定義為一個酶活力單位。
GS（μmol/h/mg prot）=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V反總÷(Cpr×V樣)÷T
=20.535×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織在每mL反應體系中每小時產生1μmol γ-谷氨?；惲u肟酸定義為一個酶活力單位,。
GS（μmol/h/g 鮮重）=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷T
=20.535×ΔA÷W
（3）按細菌或細胞密度計算
單位定義：每1萬個細菌或細胞在每mL反應體系中每小時產生1μmol γ-谷氨?；惲u肟酸定義為一個酶活力單位。
GS（μmol/h/104 cell）=(ΔA-0.0008)÷0.4174×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.041×ΔA
V反總：反應體系總體積,，0.3mL,； V樣：加入樣本體積，0.07mL,；V樣總：加入提取液體積,，1 mL；T：反應時間,，30 min,；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL,；W：樣本質量,，g；500：細菌或細胞總數(shù),，500萬,。
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