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目錄:上海牧榮生物科技有限公司>>實(shí)驗(yàn)試劑>>試劑盒>> 蛋白質(zhì)羰基測(cè)試盒

蛋白質(zhì)羰基測(cè)試盒
  • 蛋白質(zhì)羰基測(cè)試盒
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更新時(shí)間:2024-05-08 15:00:51瀏覽次數(shù):410評(píng)價(jià)

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蛋白質(zhì)羰基測(cè)試盒

微量法100T/48S

注意:正式實(shí)驗(yàn)之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定,。

測(cè)定意義:

蛋白質(zhì)羰基是多種氨基酸在蛋白質(zhì)的氧化修飾過(guò)程中的早期標(biāo)志,其含量高低表明蛋白質(zhì)氧化損傷程度的大小,,是衡量蛋白質(zhì)氧化損傷的主要指標(biāo),。

測(cè)定原理:

羰基與2,4-二硝*苯肼反應(yīng)生成紅色2,4-二硝*苯腙,,在370nm處有特征吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

天平,、恒溫水浴鍋,、低溫離心機(jī)、漩渦震蕩儀,、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板,、蒸餾水,、無(wú)水乙醇、乙酸乙酯,。

試劑組成和配制:

提取液:液體100mL×1瓶,,4℃保存。

試劑一:粉劑0.1g×5支,,4℃避光保存,。(使用前根據(jù)樣品數(shù),每支加1mL水溶解,,每支為10個(gè)樣品用量)

試劑二:液體6mL×1瓶,,4℃避光保存。

試劑三:液體6mL×1瓶,,4℃保存,。

試劑四:液體15mL×1瓶,4℃保存,。

試劑五:根據(jù)測(cè)定樣品量,,將乙酸乙酯和無(wú)水乙醇等體積混合。

試劑六:液體60mL×1瓶,,4℃保存,。

樣品處理:

組織樣品:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,,于4℃,,4000g離心10min,取上清,,加入0.1mL試劑一,,室溫放置10min,4℃,,10000g離心10min,,取上清待測(cè)。

細(xì)菌,、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液),,冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,,超聲3秒,間隔7秒,,總時(shí)間3min),;然后10000g,4℃,,離心10min,,取上清置于冰上待測(cè)。

血清等液體樣本:直接測(cè)定,。

測(cè)定步驟和操作表:

  1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至370nm。

  2. 操作表


對(duì)照管

測(cè)定管

樣品(μL)

60

60

試劑二(μL)


120

試劑三(μL)

120


混勻,,37℃避光反應(yīng)1h

試劑四(μL)

150

150

靜置5min,,4℃,12000g離心15min,,棄上清,,留沉淀

試劑五(μL)

300

300

漩渦混勻,4℃,,12000g離心10min,,棄上清,留沉淀

試劑五(μL)

300

300

漩渦混勻,,4℃,,12000g離心10min,棄上清,,留沉淀

試劑五(μL)

300

300

漩渦混勻,,4℃,12000g離心10min,,棄上清,,留沉淀

試劑六(μL)

300

300

漩渦混勻,37℃溫育15min,,沉淀全部溶解后,,4℃,12000g離心15min,,取上清200μL于微量石英比色皿/96孔板中,,測(cè)定A370。ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管

計(jì)算公式:

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

按照樣本蛋白濃度計(jì)算

蛋白質(zhì)羰基含量(μmol/mg prot)= [ΔA370×V反總÷(ε×d)]÷(V樣×Cpr) =0.227×ΔA370÷Cpr

按照樣本重量計(jì)算

蛋白質(zhì)羰基含量(μmol/g 鮮重)= [ΔA370×V反總÷(ε×d)]÷(W ×V樣÷V樣總) =0.227×ΔA370÷W

3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

蛋白質(zhì)羰基含量(μmol/104cell)= [ΔA370×V反總÷(ε×d)]÷(細(xì)胞數(shù)量 ×V樣÷V樣總) =0.227×ΔA370÷細(xì)胞數(shù)量

按照液體體積計(jì)算

蛋白質(zhì)羰基含量(μmol/mL)= [ΔA370×V反總÷(ε×d)]÷V樣=0.227×ΔA370

V反總:反應(yīng)體系總體積,,0.3 mL,;ε:羰基毫摩爾消光系數(shù),22 L/mmol/cm;d:比色皿光徑,,1cm,;V樣:加入樣本體積,0.06 mL,;V樣總:加入提取液體積,,1 mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,,mg/mL,,W:樣本質(zhì)量,g

  1. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1. 按照樣本蛋白濃度計(jì)算

蛋白質(zhì)羰基含量(μmol/mg prot)= [ΔA370×V反總÷(ε×d)]÷(V樣×Cpr) =0.454×ΔA370÷Cpr

2. 按照樣本重量計(jì)算

蛋白質(zhì)羰基含量(μmol/g 鮮重)= [ΔA370×V反總÷(ε×d)]÷(W ×V樣÷V樣總) =0.454×ΔA370÷W

3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

蛋白質(zhì)羰基含量(μmol/104cell)= [ΔA370×V反總÷(ε×d)]÷(細(xì)胞數(shù)量 ×V樣÷V樣總) =0.454×ΔA370÷細(xì)胞數(shù)量

4. 按照液體體積計(jì)算

蛋白質(zhì)羰基含量(μmol/mL)= [ΔA370×V反總÷(ε×d)]÷V樣=0.454×ΔA370

V反總:反應(yīng)體系總體積,,0.3 mL,;ε:羰基毫摩爾消光系數(shù),22 L/mmol/cm,;d:96孔板光徑,0.5cm,;V樣:加入樣本體積,,0.06 mL;V樣總:加入提取液體積,,1 mL,;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,,W:樣本質(zhì)量,,g

 

注意事項(xiàng):

1. 試劑一使用前根據(jù)要測(cè)定的樣品數(shù)現(xiàn)配,配置好后4℃保存,,若變?yōu)楹谏?,則不能使用。

2. 試劑二見(jiàn)光易分解,,反應(yīng)需嚴(yán)格避光,。


上海牧榮生物科技有限公司

  1. 國(guó)內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷(xiāo)代理。

  2. 國(guó)外試劑的訂購(gòu),??商峁W美實(shí)驗(yàn)室品牌的采購(gòu)方案。

  3. 提供加急物流處理,,進(jìn)口貨物,,最快交期1-2周。

  4. 進(jìn)出口貨物代理服務(wù),。

  5. 公司代理眾多有名生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑,、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,,Click Chemistry tools,,Nanoprobes,,Ancell,NANOCS,,Ambeed, Inc,,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,,Torrey Pines Biolabs,,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點(diǎn)合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等,。

  6. 質(zhì)量保證,,所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活,。公司堅(jiān)持“一站式"服務(wù)模式,,為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn),、開(kāi)發(fā)需求,。公司整合國(guó)際與國(guó)內(nèi)資源,加強(qiáng)網(wǎng)絡(luò)建設(shè),,提高公司內(nèi)部運(yùn)作效率,,為客戶提供方便、快捷的服務(wù),。

  7. 公司突出創(chuàng)新思維,,提高工作效能,減低運(yùn)作成本,,為客戶提供優(yōu)惠的價(jià)格,。

蛋白質(zhì)羰基測(cè)試盒


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