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脂氧合酶 （LOX)測試盒

微量法100T/48S

注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定,。

測定意義：

LOX廣泛存在于動植物組織中,，催化不飽和脂肪酸氧化反應(yīng),，導(dǎo)致膜脂過氧化,。在生物體的生長發(fā)育、成熟衰老及逆境脅迫過程中具有重要作用,。

測定原理：

LOX催化亞油酸氧化,，氧化產(chǎn)物在280nm處有特征吸收峰；測定280nm吸光度增加速率,，來計算LOX活性,。

自備儀器和用品：

研缽、冰,、臺式離心機,、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀,、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、可調(diào)式移液槍和蒸餾水,。

試劑組成和配制：

試劑一：液體100mL×1瓶,，4℃保存。

試劑二：液體20mL×1瓶,，4℃保存,。

試劑三：粉劑×1支，4℃保存,。

粗酶液提?。?/p>

按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿,。16000g,，4℃離心20min，取上清置冰上待測,。

測定：

1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上,，調(diào)節(jié)波長到280 nm，蒸餾水調(diào)零,。

2. 在試劑三中加入10mL試劑二（振蕩混勻1min）,，在30℃水浴中預(yù)熱10 min以上。用不完的試劑4℃保存,。

3. 對照管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL樣本和180μL試劑二,，30℃反應(yīng)30min后，記錄A對照,。

4. 測定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL樣本和180μL試劑三,，30℃反應(yīng)30min后，記錄A測定,。

5. ΔA=A測定-A對照

LOX活性計算：

（1）按照蛋白濃度計算

活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘催化吸光值變化0.01個單位為1個酶活單位,。

LOX (U/mg prot) =ΔA×V反總÷(Cpr×V樣)÷T×100

= 33.33×ΔA÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘催化吸光值變化0.01個單位為1個酶活單位。

LOX (U/g 鮮重) =ΔA×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T×100

= 33.33×ΔA÷W

Cpr：上清液蛋白濃度,，mg/mL,，需另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒,；V反總：反應(yīng)體系總體積,，200μL=0.2mL；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積,，20μL=0.02mL,；W ：樣品質(zhì)量，g；V樣總：上清液總體積,，1mL,；T：反應(yīng)時間，30min,。

上海牧榮生物科技有限公司

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