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羥自由基清除能力測試盒

微量法100T/96S

注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定,。

測定意義：

羥自由基作用于體內(nèi)蛋白質(zhì),、核酸,、脂類等生物分子,，造成細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能受損,，進而導(dǎo)致體內(nèi)代謝紊亂引起疾病。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標(biāo)之一,，在抗氧化類保健品和藥品研究中得到廣泛應(yīng)用,。

測定原理：

H2O2/ Fe2+ 通過Fenton反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基，將鄰二氮菲- Fe2+水溶液中Fe2+氧化為Fe3+ ,，導(dǎo)致536nm吸光度下降,，樣品對536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了樣品清除羥自由基的能力,。

自備實驗用品：

恒溫水浴鍋,、酶標(biāo)儀、96孔板和蒸餾水,。

試劑組成和配制:

提取液：液體100 mL×1瓶,，4℃保存。

試劑一：液體12mL×1瓶,，4℃避光保存,。

試劑二：液體6mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體12 mL×1瓶,，4℃保存,。

試劑四：液體6mL×1瓶，4℃保存,。

樣品的制備：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，然后10000g,，4℃離心10min,，取上清，置冰上待測,。

2. 血清,、果汁等液體樣品可直接測定。

3. 提取物（或者藥物）可配制成一定濃度,，如5 mg/mL,。

操作步驟：

1. 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長至536nm,。

2. 工作液配制：使用之前按照每管試劑一：試劑二：試劑三=100:50:100（µL）的比例配制,，用多少配多少，混勻,。

3. 在EP管中加入如下試劑

注意：空白管和對照管只需測定一次,。

計算公式:

羥自由基清除率 D% =（A測-A對）÷（A空-A對）×100%

A空,、A對、A測：空白管,、對照管和測定管的吸光值,。

注意事項:

為了比較不同樣品羥自由基清除能力，對于同一批樣品必須加入等量的樣品,，血清,、組織勻漿、果汁等液體樣品加入同樣體積,，提取物（或者藥物）配制成同樣濃度,。

上海牧榮生物科技有限公司

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