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水土中亞硝酸鹽含量測試盒
微量法100T/96S
注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
亞硝酸鹽廣泛存在于水體和土壤中,,不僅是有機氮分解的重要中間產物,,也可能來自污染。人體攝入過量后,,可誘發(fā)消化系統癌變,。
測定原理:
在酸性條件下,亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸反應生成重氮化合物,,再與N-1-萘基乙二胺形成紫紅色偶氮化合物,,在540nm處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器:
天平,、常溫離心機,、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板,、蒸餾水,。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,室溫保存,。
試劑一:液體10mL×1瓶,,4℃避光保存。
試劑二:液體10mL×1瓶,,4℃避光保存,。
樣品處理:
土壤樣品:準確稱取過篩后的土壤約0.2g,加入1 mL 提取液,,室溫震蕩1h,,8000g,,25℃離心15min,靜置,,待其分層后,,取上清液待測。
水樣:直接檢測,;如果渾濁,,可以離心后再測定。
測定步驟和操作表:
分光光度計/酶標儀預熱30min,,調節(jié)波長至540nm,蒸餾水調零,。
操作表
測定管 | 空白管 | |
提取液(µL) | 70 | |
樣品(µL) | 70 | |
試劑一(µL) | 65 | 65 |
試劑二(µL) | 65 | 65 |
混勻,,25℃靜置15min,于微量石英比色皿/96孔板中檢測540nm處吸光值A,。 △A=A測定 - A空白 |
注意:空白管只需測定一次,。
亞硝酸鹽含量計算:
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線回歸方程為:y=0.234x + 0.0002,R2= 0. 999 x為標準品亞硝酸鈉濃度(μg/ml) y為吸光值A,。
NO2-(μg/g)=(△A-0.0002)÷0.234×V樣÷(V樣÷V樣總×W)×0.6668
=(A – 0.086)÷0.234×1.5×0.6668÷W
=4.27×(△A-0.0002)÷W
V樣總:加入提取液體積,,1.5 mL; V樣:反應中樣品體積,,0.07mL,;W:樣品質量,g,。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線回歸方程為:y=0.141x +0.095,,R2= 0. 9991 x為標準品亞硝酸鈉濃度(μg/ml) y為吸光值A。
NO2-(μg/g )=(△A-0.0002)÷0.141×V樣÷(V樣÷V樣總×W)×0.6668
=(△A-0.0002)÷0.141×1.5×0.6668÷W
=7.09×(△A-0.0002)÷W
V樣總:加入提取液體積,,1.5 mL,; V樣:反應中樣品體積,0.07mL,;W:樣品質量,,g。
注意事項:
試劑盒2-8℃保存,。
試劑對人體有一定的危害,,請穿實驗服,戴手套操作,。
若檢測出得OD值在標準曲線范圍外,,請將樣品進行適當的濃縮或稀釋(A540 <0.09濃縮,A540 > 1.5 適當稀釋),。
*低檢出限為0.5μg/g,。
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水土中亞硝酸鹽含量測試盒