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植物花色苷測試盒

微量法 100管/96樣

正式測定前取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

花色苷是一類易溶于極性溶劑的天然色素，屬黃酮類化合物,?；ㄉ諒V泛存在于植物的根、莖,、葉,、花和果實中，使其呈現(xiàn)由紅到紫等不同顏色,，是植物主要的呈色物質(zhì),。

測定原理：

采用pH示差法測定花色苷含量，當pH為1.0時花色苷在530nm處有最大吸收峰,而當pH為4.5時,花色苷轉變?yōu)闊o色查爾酮形式,在530處無吸收峰, 利用此特性分別測定在不同pH下的530nm和700nm處的吸光度值,。pH示差法減少了溶液pH和溶劑差異的影響,，排除了其他非花色苷類物質(zhì)對檢測結果的干擾。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀,、水浴鍋,、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板,、研缽和蒸餾水,。

試劑的組成和配制：

提取液：液體100 mL× 1瓶，4℃保存,；

試劑一：液體20 mL× 1瓶,，4℃保存；

試劑二：液體20 mL × 1瓶，4℃保存,；

花色苷的提?。?nbsp;

按照烘干樣品質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g烘干樣品，加入1mL提取液）,，充分勻漿后轉移到EP管中，提取液定容至1 mL,，蓋緊后4℃浸提24 h,，8000 g，常溫離心10 min,，取上清液待測,。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,；試劑一和試劑二25℃（室溫）預熱10min以上,；

2、取20 µL上清液和180 µL試劑一（相當于稀釋10倍）,，40℃水浴20min,，分別測定530nm和700nm處的吸光值，分別記為A1和A2,。

3. 取20 µL上清液和180 µL試劑二（相當于稀釋10倍）,，40℃水浴20min，分別測定530nm和700nm處的吸光值,，分別記為A3和A4,。

4. 計算△A=(A1-A2)-(A3-A4)

注意：如果A1大于1，可以適當加大稀釋倍數(shù),，保證總體積200 µL不變,，如10 µL上清液和190 µL試劑一（相當于稀釋20倍）；如果A1小于0.1,，可以適當縮小稀釋倍數(shù),，保證總體積不變，如100 µL上清液和100 µL試劑一（相當于稀釋2倍）,，使A1保持在0.1~1范圍內(nèi),，可提高檢測靈敏度；同樣調(diào)整上清液和試劑二體積比例,；計算時以實際稀釋倍數(shù)代入下述公式中,。

花色苷含量計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

花色苷含量（µg/g干重）=[ΔA×V÷（ε×d）×M×F×106]÷W=16.7×ΔA× F÷W

V：提取液體積，1×10-3L,；ε：花色苷的摩爾消光系數(shù),，2.69×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm,；M：花色苷的相對分子質(zhì)量：449.2g/mol,；F：稀釋倍數(shù)；106：1g=106µg,；W：樣本干重：g,。

b.用96孔板測定的計算公式如下

花色苷含量（µg/g干重）=[ΔA×V÷（ε×d）×M×F×106]÷W=33.4×ΔA× F÷W

V：提取液體積，1×10-3L,；ε：花色苷的摩爾消光系數(shù),，2.69×104 L / mol /cm；d：96孔板光徑,，0.5cm,；M：花色苷的相對分子質(zhì)量：449.2g/mol；F：稀釋倍數(shù),；106：1g=106µg,；W：樣本干重：g。ΔA線性范圍為0.005-0.5,。

上海牧榮生物科技有限公司

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