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植物原花青素（OPC）測試盒

微量法100T/48S

注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定,。

測定意義:

原花青素（Oligomeric Proantho Cyanidins，OPC）是一類黃烷醇單體及其聚合體的多酚化合物,，廣泛存在于植物的各種器官中,，具有強的抗氧化性和清除自由基的作用，廣泛的應(yīng)用于醫(yī)藥,，食品,，化妝品，保健品行業(yè),。

測定原理:

在酸性條件下,，植物原花青素A環(huán)上的間苯二酚和間苯三*與香草醛發(fā)生縮合反應(yīng)，產(chǎn)生有色化合物,，在500nm處有特征吸收峰,，測定500nm光吸收值，可計算植物中原花青素的含量,。

自備實驗用品及儀器:

天平,、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀,、微量石英比色皿/96孔板,、蒸餾水、鹽酸,、無水乙醇和甲醇,。

試劑組成和配制:

提取液：60%乙醇，自備,，4℃保存,。（60mL無水乙醇溶于40mL蒸餾水）

試劑一：8%鹽酸10mL，自備,，4℃保存,。（800μL鹽酸溶于9.2mL甲醇）

試劑二：粉劑0.1g×1瓶，4℃避光保存,，臨用前加10mL甲醇溶解,。

測定工作液：臨用前按照用量將試劑一和試劑二按照1:1混合,。

空白工作液：臨用前按照用量將試劑一和甲醇按照1:1混合。

OPC提取:

稱取約0.1g樣本,，加入2mL提取液,，勻漿后，60℃振蕩提取2h,， 10000g,，25℃，離心10min,，取上清待測,。

測定操作表:

1. 分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長至500nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2. 操作表

OPC計算公式:

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y=0.0194x+0.0006,，R2=0.999

OPC含量（mg/g 鮮重）= (ΔA-0.0006）÷0.0194×V反總÷(V樣÷V樣總×W)×10-3

    = 0.515×(ΔA-0.0006）÷W

V樣總：加入提取液體積，2mL,； V反總：反應(yīng)總體積,，0.2mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積,，0.04mL,；W：樣品質(zhì)量，g

b.用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y=0.0097x+0.0006,，R2=0.999

OPC含量（mg/g 鮮重）= (ΔA-0.0006）÷0.0097×V反總÷(V樣÷V樣總×W)×10-3

= 1.03×(ΔA-0.0006）÷W

V樣總：加入提取液體積,，2mL； V反總：反應(yīng)總體積,，0.2mL,；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04mL,；W：樣品質(zhì)量,，g

注意事項：

1、配制好的試劑二應(yīng)盡快使用,，4℃保存時間不超過一個月,。

2、吸光度變化應(yīng)該控制在0.01～0.8之間,。否則加大樣品量或稀釋樣品,，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變,。

3、*低檢出限為10μg/g,。

上海牧榮生物科技有限公司

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