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果膠酶測試盒
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更新時間:2024-05-07 14:08:52瀏覽次數(shù):399評價

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果膠酶測試盒 果膠酶(pectinase)試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實驗室產(chǎn)品.為客戶全面解決實驗,、生產(chǎn)、開發(fā)需求,提供方便,、快捷的服務(wù),。

果膠酶測試盒

 微量法100T/48S

注意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義

果膠酶(pectinase)是一類分解果膠質(zhì)酶類的總稱,,包括原果膠酶,,果膠酯酶,多聚半乳糖醛酸酶和果膠裂解酶四大類,,廣泛存在于植物果實和微生物中,,主要用于食品、釀酒,、環(huán)保,、醫(yī)藥、紡織及日化用品行業(yè),。

測定原理

果膠酶水解果膠生成半乳糖醛酸,,具有還原性醛基,與DNS試劑反應(yīng)生成紅棕色物質(zhì),,在540nm有特征吸收峰,,測定540nm處吸光值變化可計算得果膠酶活性,。

自備實驗用品及儀器

天平、低溫離心機,、可見分光光度計/酶標(biāo)儀,、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋,。

試劑組成和配制

提取液:液體100mL×1瓶,,4℃保存。

試劑一:液體20mL×1瓶,,4℃保存,。

試劑二:粉劑×2瓶,4℃保存,;臨用前加入7.5mL試劑一,,50℃加熱溶解,用不完的試劑4℃保存一周,。

試劑三:液體20mL×1瓶,,4℃避光保存。

酶液提取

1.組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,,加入1mL提取液),,進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,,取上清,,置冰上待測。

2.細(xì)菌,、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),,冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,,間隔7秒,總時間3min),;然后10000g,,4℃離心10min,取上清置于冰上待測,。

3. 細(xì)胞培養(yǎng)液等:直接檢測,。

測定操作表


對照管

測定管

試劑二(µL)

120

120

50℃水浴溫育5min

樣本(µL)


30

煮沸樣本(µL)

30


混勻,50℃水浴反應(yīng)30min

試劑三(µL)

150

150

沸水浴5min,,冰浴冷卻終止反應(yīng),,8000g,4℃,,離心10min,,蒸餾水調(diào)零,,取上清于微量石英比色皿或96孔板測定540nm處吸光值A(chǔ),△A=A測定管-A對照管,。每個測定管需設(shè)一個對照管,。

酶活性計算公式

  1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 3.9642x - 0.008;R2 = 0.9996,;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度,,mg/mL;y為吸光值,。

1.按照蛋白濃度計算

酶活性定義在50℃,,pH3.5條件下,每毫克蛋白每小時分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位,。

果膠酶活性(mg/h/mg prot)= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷(V樣×Cpr)÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr

2.按照樣本質(zhì)量計算

酶活性定義在50℃,,pH3.5條件下,每克樣本每小時分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位,。

果膠酶活性(mg/h /g 鮮重)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷(V樣×W÷V樣總)÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷W

3. 按細(xì)胞數(shù)量計算

酶活性定義在50℃,,pH3.5條件下,每104細(xì)胞每小時分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位,。

 

果膠酶活性(mg/h /104cell)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷(V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總)÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷細(xì)胞數(shù)量

4.細(xì)胞培養(yǎng)液

酶活性定義在50℃,,pH3.5條件下,每毫升培養(yǎng)液每小時分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位,。

果膠酶活性(mg/h /mL)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷V樣÷T=2.523×(ΔA+0.008)

V反總:反應(yīng)總體積,,0.15mL;V樣:反應(yīng)中樣本體積,,0.03mL,;V樣總:加入提取液體積,1mL,;Cpr:樣本蛋白濃度,,mg/mL;W,,樣本質(zhì)量,,g;T:反應(yīng)時間,,0.5h

  1. 用96孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 1.9821x - 0.008,,R2 = 0.9996;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度,,mg/mL,;y為吸光值。

1.按照蛋白濃度計算

酶活性定義在50℃,,pH3.5條件下,,每毫克蛋白每小時分解果膠產(chǎn),。生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位。

果膠酶活性(mg/h/mg prot)=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷(V樣×Cpr)÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷Cpr

2.按照樣本質(zhì)量計算

酶活性定義在50℃,,pH3.5條件下,,每克樣本每小時分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位。

 

果膠酶活性(mg/h/g 鮮重)=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷(V樣×W÷V樣總)÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷W

3. 按細(xì)胞數(shù)量計算

酶活性定義在50℃,,pH3.5條件下,,每104細(xì)胞每小時分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位。

果膠酶活性(mg/h /104cell)=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷(V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總)÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷細(xì)胞數(shù)量

4.細(xì)胞培養(yǎng)液

酶活性定義在50℃,,pH3.5條件下,,每毫升培養(yǎng)液每小時分解果膠產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個酶活力單位。

果膠酶活性(mg/h/mL)=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷V樣÷T=5.045×(ΔA+0.008)

V反總:反應(yīng)總體積,,0.15mL,;V樣:反應(yīng)中樣本體積,0.03mL,;V樣總:加入提取液體積,,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,,mg/mL,;W,樣本質(zhì)量,,g,;T:反應(yīng)時間,0.5h

注意事項

  1. 試劑二若有沉淀析出,,請置于50℃加熱溶解,。

  2. 測定之前請先做預(yù)實驗,如果吸光值較高或較低,,請用提取液做適當(dāng)?shù)南♂尰蛘呒哟髽颖玖?,并在計算公式中乘以稀釋倍?shù)或者以實際加入的樣本體積參與計算。

  3. 煮沸樣本建議在沸水中煮沸10分鐘,,以將酶滅活,。



上海牧榮生物科技有限公司

  1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

  2. 國外試劑的訂購,。可提供歐美實驗室品牌的采購方案,。

  3. 提供加急物流處理,,進(jìn)口貨物,最快交期1-2周,。

  4. 進(jìn)出口貨物代理服務(wù),。

  5. 公司代理眾多有名生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑,、儀器和實驗室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,,Click Chemistry tools,,Nanoprobes,Ancell,,NANOCS,,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,,Tulip Biolabs, Inc,,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等,。

  6. 質(zhì)量保證,所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù),。付款方式靈活,。公司堅持“一站式"服務(wù)模式,為客戶全面解決實驗,、生產(chǎn),、開發(fā)需求。公司整合國際與國內(nèi)資源,,加強網(wǎng)絡(luò)建設(shè),,提高公司內(nèi)部運作效率,為客戶提供方便,、快捷的服務(wù),。

  7. 公司突出創(chuàng)新思維,提高工作效能,,減低運作成本,,為客戶提供優(yōu)惠的價格。

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