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總膽固醇（TC）含量測試盒

微量法 100T/96S

注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義：

TC包括游離膽固醇和膽固醇酯。TC是指組織中所有脂蛋白所含膽固醇之總和,。

測定原理：

利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇（FC）和游離脂肪酸（FFA），從而把膽固醇酯轉(zhuǎn)化為FC,；進一步利用膽固醇氧化酶催化FC氧化,，生成△4-膽甾烯酮和H2O2；最后利用過氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚,，生成紅色醌類化合物,；在500nm有特征吸收峰，其顏色深淺與TC含量成正比,。

自備儀器和用品：

水浴鍋,、可調(diào)式移液槍、酶標(biāo)儀,、96孔板,。

試劑組成和配置：

試劑一：異丙醇100mL（自備）,；

試劑二：液體20mL×1瓶,，4℃保存；

試劑三：粉劑×1瓶,，4℃保存,；

試劑四：液體40μL×1瓶，4℃保存,；

TC標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1支,，0.5μmol/mL，4℃保存。

TC的提?。?/strong>

1,、組織中TC的提取：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿,，8000g 4℃離心10min，取上清,，即TC待測液,。

2、細胞,、細菌中TC的提?。合仁占?00-500萬細胞或細菌到離心管內(nèi)，棄上清,，加1mL試劑一,，超聲波破碎1min（強度20％，超聲2s,，停1s）,，即TC待測液。

3,、血清（漿）等樣品：直接測定,。

測定操作：

1. /酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到500 nm,。

2. TC工作液的配制：臨用前,，吸取約0.8mL試劑二分別加入試劑三和試劑四瓶中，充分溶解后再全部轉(zhuǎn)移回試劑二瓶中,，充分混勻,，TC工作液置于37℃水浴10min。用不完的工作液4℃保存一周,。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：依次在96孔板中加入20μL FC標(biāo)準(zhǔn)液和180μL TC工作液,，混勻，37℃靜置3h后于500nm測定A標(biāo)準(zhǔn)管,。

4. 測定管：依次在96孔板中加入20μL FC待測液和180μLTC工作液,，混勻，37℃靜置3h后于500nm測定A測定管,。

5. 空白管：依次在96孔板中加入20μL 試劑一和180μLTC工作液,，混勻，37℃靜置3h后于500nm測定A測定管,。

注意：標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測定一次,。

計算公式：

1. 血清（漿）中TC含量計算：

TC（μ mol /dL）=C標(biāo)準(zhǔn)液×（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）×100

 =50×（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）

C標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/mL,；100 mL：1dL=100 mL。

2. 組織中TC含量計算：

(1)按樣本蛋白濃度計算

TC（μ mol / mg prot）= C標(biāo)準(zhǔn)液×（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷Cpr

    = 0.5×（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷Cpr

(2)按樣本質(zhì)量計算

TC（μ mol / g 鮮重）= C標(biāo)準(zhǔn)液×（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷W

    = 0.5×（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷W

C標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/mL,；樣本蛋白濃度,，mg/mL；W：樣本質(zhì)量,，g/mL

3. 細胞,、細菌中TC含量計算：

TC（μ mol /104 cell）=C標(biāo)準(zhǔn)液×（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷細菌或細胞（104 cell /L）

    =0.5×（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷細菌或細胞（104 cell /L）

C標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/mL。

*低檢出限為1nmol/mL,。

上海牧榮生物科技有限公司

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