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山梨醇含量測試盒
微量法 100管/96樣
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
山梨醇廣泛存在于動物,、植物,、微生物和培養(yǎng)細胞中,,不僅是糖運輸形式之一,而且與生物抗逆性和食物風(fēng)味密切相關(guān),。因此,,在糖代謝、抗逆性和食品研究中經(jīng)常需要檢測山梨醇含量變化,。
測定原理:
山梨醇在堿性溶液中與銅離子形成藍色絡(luò)合物,,在655nm波長有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀,、水浴鍋,、移液器、微量石英比色皿/96孔板,、研缽,、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體3.5mL×1瓶,,4℃保存,;
試劑二:液體3.5mL×1瓶 ,,4℃保存,。
山梨醇的提取:
按照組織質(zhì)量(g):蒸餾水體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,,加入1mL蒸餾水),,研磨成勻漿,95℃水浴10分鐘(蓋緊,,以防止水分散失),,冷卻后,8000g,,25℃離心10min,,取上清液待測。
測定步驟
分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上,,調(diào)節(jié)波長至655nm,,蒸餾水調(diào)零。
2,、加樣表(在EP管中依次加入下列試劑):
試劑(μL) | 空白管 | 測定管 |
試劑一 | 35 | 35 |
試劑二 | 35 | 35 |
樣本 | 230 | |
蒸餾水 | 230 |
混勻后室溫靜置15min,,8000g,25℃離心10min,取200μL上清液至微量石英比色皿或96孔板中,,測655nm下吸光值A(chǔ),,計算ΔA=A測定管-A空白管??瞻坠苤灰鲆还?。
山梨醇含量計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.352x - 0.002,;x為標準品濃度(mg/mL),,y為吸光值。
2,、按照樣品質(zhì)量計算
山梨醇含量(mg /g 鮮重)=[(ΔA+0.002) ÷0.352×V1]÷(W×V1÷V2)=2.84×(ΔA+0.002) ÷W
3,、按照樣本蛋白濃度計算
山梨醇含量(mg /mg prot)=[(ΔA+0.002) ÷0.352×V1]÷(V1×Cpr)=2.84×(ΔA+0.002) ÷Cpr
V1:加入樣本體積,0.23mL,;V2:加入提取液體積,,1 mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,,mg/mL,;W:樣本質(zhì)量,g
b.用96孔板測定的計算公式如下
1,、標準條件下測定回歸方程為y = 0.176x - 0.002,;x為標準品濃度(mg/mL),y為吸光值,。
2,、按照樣品質(zhì)量計算
山梨醇含量(mg /g 鮮重)=[(ΔA+0.002) ÷0.176×V1]÷(W×V1÷V2)=5.68×(ΔA+0.002) ÷W
3、按照樣本蛋白濃度計算
山梨醇含量(mg /mg prot)=[(ΔA+0.002) ÷0.176×V1]÷(V1×Cpr)=5.68×(ΔA+0.002) ÷Cpr
V1:加入樣本體積,,0.23mL,;V2:加入提取液體積,1 mL,;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,,g
注意:*低檢測限為1μg/g鮮重或0.01μg /mg prot
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