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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
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多胺氧化酶(PAO)測試盒
微量法 100管/96樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
多胺氧化酶是催化生物體內(nèi)多胺氧化的關(guān)鍵酶,,通過調(diào)節(jié)體內(nèi)多胺水平和生成物的濃度,,參與各種植物體對逆境脅迫的反應和生長發(fā)育過程。
測定原理:
PAO催化多胺氧化產(chǎn)生過氧化氫,,在過氧化物酶存在的條件下與底物顯色,,在550nm下有特征吸收峰,,通過測定吸光值增加速率來反映PAO活性,。
需自備的儀器和用品:
酶標儀、臺式離心機,、可調(diào)式移液器,、96孔板,、研缽,、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體120mL×1瓶,,4℃保存,;
試劑二:液體3mL×1瓶,4℃保存;
試劑三:液體1.5mL×1瓶,,4℃保存,;
試劑四:液體1.5mL×1瓶,4℃保存,。
粗酶液提?。?/p>
組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿,,然后10000g,,4℃離心20min,取上清,,置冰上待測,。
細菌、真菌:按照細胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),,冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,,超聲3秒,間隔7秒,,總時間3min),;然后10000g,4℃,,離心10min,,取上清置于冰上待測。
血清等液體:直接測定,。
測定步驟:
酶標儀預熱30min以上,,調(diào)節(jié)波長至550nm。
樣本測定
試劑名稱(µL) | 測定管 |
試劑一 | 140 |
試劑二 | 20 |
試劑三 | 10 |
樣本 | 20 |
試劑四 | 10 |
迅速混勻,,于550nm下測定初始吸光值A1與30min后吸光值A2,。ΔA=A2-A1。 |
PAO活性計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位定義:每mg組織蛋白在每mL反應體系中每分鐘A550變化0.001為一個酶活力單位,。
PAO(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.001÷T =333.33×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算:
單位定義:每g組織在每mL反應體系中每分鐘A550變化0.001為一個酶活力單位,。
PAO(U/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.001÷T =333.33×ΔA÷W
(3)按細菌或細胞密度計算:
單位定義:每1萬個細菌或細胞在每mL反應體系中每分鐘A550變化0.001為一個酶活力單位。
PAO(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.001÷T =0.667×ΔA
按液體體積計算
單位的定義:每mL液體樣本在每mL反應體系中每分鐘A550變化0.001為一個酶活力單位,。
PAO(U/mL)=ΔA×V反總÷V樣÷0.001÷T =333.33×ΔA
V反總:反應體系總體積,,0.2mL;V樣:加入樣本體積,,0.02 mL,;V樣總:加入提取液體積,1 mL,;T:反應時間,,30 min,;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,;W:樣本質(zhì)量,,g;500:細菌或細胞總數(shù),,500萬。
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多胺氧化酶(PAO)測試盒