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土壤中性磷酸酶(SNP)測試盒

微量法 100T/96S

注意：正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定,。

測定意義：

土壤磷酸酶是催化土壤有機(jī)磷礦化的酶,，其活性的高低直接影響著土壤中有機(jī)磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性,，是評(píng)價(jià)土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強(qiáng)度的指標(biāo),。磷酸酶活性受到土壤碳,、氮含量、有效磷含量和pH的顯著影響，根據(jù)最適PH范圍,，一般把土壤磷酸酶分為中性,、酸性和堿性三種類型。

測定原理：

中性環(huán)境中,，S-NP催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉,，通過測定酚的生成量即可計(jì)算出NP活性。

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、微量玻璃比色皿/96孔板,、臺(tái)式離心機(jī)、37℃恒溫培養(yǎng)箱,、分析天平,、可調(diào)式移液器、冰,、蒸餾水,、乙醇和甲苯。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶,，4℃避光保存,。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存,。用前加100mL蒸餾水充分溶解,。

試劑三：液體×1瓶，4℃保存,。

試劑四：粉劑×1瓶,，4℃避光保存。臨用前加576μL無水乙醇（自備）,，24μL蒸餾水充分溶解,。（變褐色后不能再使用）

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1瓶，0.5 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液,，4℃保存,。

催化反應(yīng)：

稱取風(fēng)干混勻土壤約0.1g，加入50μL甲苯（自備）,，輕搖15min,；加400μL試劑一并且搖勻后，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱,，開始計(jì)時(shí),，催化反應(yīng)24h；到時(shí)后迅速加入1mL試劑二充分混勻,，以終止酶催化的反應(yīng),。8000g，25℃離心10min，取上清液置于冰上待測,。

顯色反應(yīng)：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min以上,，調(diào)節(jié)波長到660 nm，蒸餾水調(diào)零,。

2. 空白管：取微量玻璃比色皿/酶標(biāo)板,，加入10μL蒸餾水，20μL試劑三,，4μL試劑四,，充分混勻，顯色后再加蒸餾水166μL,，混勻后25℃靜置30min,，于660nm測定吸光度，記為A空白管,。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取微量玻璃比色皿/酶標(biāo)板,，加入10μL標(biāo)準(zhǔn)液，20μL試劑三,，4μL試劑四,，充分混勻，顯色后再加蒸餾水166μL,，混勻后25℃靜置30 min,，于660nm測定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管,。

4. 測定管：取微量玻璃比色皿/酶標(biāo)板，加入10μL上清液,，20μL試劑三,，4μL試劑四，充分混勻,，顯色后再加蒸餾水166μL,，混勻后室溫25℃30 min，于660nm測定吸光度,，記為A測定管,。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

S-NP活性計(jì)算：

a.使用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

活性單位定義：37℃中每克土壤每天釋放1nmol酚為1個(gè)酶活單位,。

S-NP（μmol/d/g 土樣）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×V總÷W÷T

= 0.725×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)÷W

C標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/mL,；V總：催化體系總體積，1.45mL,；W：土壤樣品質(zhì)量,，g；T：催化反應(yīng)時(shí)間，24 h=1 d,。

上海牧榮生物科技有限公司

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