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土壤N乙酰βD葡萄糖苷酶（SNAG）測試盒

微量法 100管/48樣

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：                           

S-NAG是溶酶體中的一種酸性水解酶，由土壤微生物分泌,。S-NAG活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān),。

測定原理：

S-NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰,，通過測定吸光值升高速率來計(jì)算NAG活性,。

自備用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī),、水浴鍋,、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板,、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：甲苯5mL×1瓶,，4℃保存,；（自備）

試劑二：粉劑×1瓶,，-20℃保存；臨用前加入10mL蒸餾水，充分溶解備用,，用不完的試劑仍-20℃保存,；

試劑三：液體20mL×1瓶，4℃保存,； 

試劑四：液體15mL×1瓶,，4℃保存； 

樣品處理：

新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干,，過30~50目篩,。

測定步驟：

1. 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至400nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2. 加樣表

混勻， 37℃振蕩反應(yīng)1h后,，90℃水浴5min（蓋緊,，防止水分散失），流水冷卻,，

10000g 25℃離心10min,，取上清液（在EP管或96孔板中加入下列試劑）

充分混勻，室溫靜置2min后,， 400nm處測定吸光值A(chǔ),，計(jì)算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設(shè)一個對照管,。

S-NAG活力計(jì)算：

a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.00645x -0.0054；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/L）,，y為吸光值,。

單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1 μmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

S-NAG活力（μmol/d/g 土樣）＝ (ΔA+0.0054) ÷0.00645×V反總÷W÷T =55.81×(ΔA+0.0054)

T：反應(yīng)時間,，1h=1/24d,； V反總：反應(yīng)體系總體積：3×10-4 L；W：樣本質(zhì)量,，0.02g,。

b.用96孔板測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.0043x -0.0054；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/L）,，y為吸光值,。

單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1 μmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

S-NAG活力（μmol/d/g 土樣）＝ (ΔA+0.0054) ÷0.0043×V反總÷W÷T =83.72×(ΔA+0.0054)

T：反應(yīng)時間,，1h=1/24d,； V反總：反應(yīng)體系總體積：3×10-4 L；W：樣本質(zhì)量，0.02g,。

上海牧榮生物科技有限公司

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