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更新時(shí)間：2024-05-06 13:54:54瀏覽次數(shù)：462評(píng)價(jià)
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β葡萄糖醛酸苷酶（βGD）測試盒
正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義
β-GD廣泛存在于動(dòng)物組織中,，是一種參與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過程的基質(zhì)降解酶，具有水解固醇葡萄糖醛酸和酸性粘多糖等生理功能,。該酶在肝細(xì)胞中含量較高,。此外在胃癌組織中含量豐富，測定胃液β-GD活性對(duì)于研究胃癌具有重要的意義,。
測定原理
β-GD催化苯酚 β-D-葡萄糖醛酸產(chǎn)生游離的酚酞,，通過測定苯酚含量反應(yīng)該酶活性高低。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、水浴鍋,、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板,、研缽、冰和蒸餾水,。
試劑的組成和配制
提取液：液體100mL×1瓶,，4℃保存；
試劑一：液體2mL×1瓶,，4℃保存,；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存,；臨用前加入2mL蒸餾水,，充分溶解待用；用不完的試劑仍-20℃保存,；
試劑三：液體15mL×1瓶,，4℃保存；
試劑四：1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液10mL,，4℃保存,；
樣品測定的前處理
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）,，進(jìn)行冰浴勻漿,。8000g 4℃離心10min，取上清,，置冰上待測,。
測定步驟
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至540nm,，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定
試劑名稱（μL） | 加樣孔 | ||
測定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 | |
試劑一 | 20 | 20 | 20 |
試劑二 | 20 | 20 | 20 |
樣本 | 10 | ||
1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液 | 10 | ||
蒸餾水 | 10 | ||
混勻后,，37℃反應(yīng)30min
試劑三 | 150 | 150 | 150 |
混勻,， 540nm下測定各管吸光值
注意：標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測一次。
β-GD活性計(jì)算
（1）按樣本鮮重計(jì)算：
單位定義：每小時(shí)每g鮮重樣品中催化產(chǎn)生 1μmol酚酞的量為一個(gè)活力單位,。
β-GD（μmol/h/g 鮮重）= (C標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷(W×V1÷V2)÷T=2×（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷W
（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位定義：每小時(shí)每mg組織蛋白催化產(chǎn)生 1μmol酚酞的量為一個(gè)活力單位,。
β-GD（μmol/h/mg prot）= (C標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷(V1×Cpr)÷T=2×（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷Cpr
C標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度， 1μmol/mL,；V1：加入樣本體積：0.01mL,；V2：加入提取液體積，1mL,；T：反應(yīng)時(shí)間,，0.5h；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本鮮重，g,。
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