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小鼠前列腺素E2(PGE2)ELISA kit,，產品編碼：JYM0603Mo

小鼠前列腺素E2(PGE2)ELISA kit，Mouse Prostaglandin E2(PGE2)ELISA Kit

【實驗方法】雙抗體夾心法?

【種屬】小鼠

【檢測范圍】 見說明書

【檢測波長】450 nm

【樣本類型】血清,、血漿,、組織、細胞上清及相關液體樣本

【反應時間】 1.5~2h

小鼠前列腺素E2(PGE2)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供科研使用,。

本試劑盒用于體外定量檢測小鼠血清,、血漿、組織,、細胞上清及相關液體樣本中前列腺素E2(PGE2)的含量,。

有效期：6個月

保存條件：2-8℃

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠前列腺素E2(PGE2)水平。用純化的小鼠前列腺素E2(PGE2)抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入前列腺素E2(PGE2)，再與HRP標記的前列腺素E2(PGE2)抗體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的前列腺素E2(PGE2)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中小鼠前列腺素E2(PGE2)濃度,。

試劑盒組成

樣本處理及要求

1.血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）,。仔細收集上清,，保存過程中如出現沉淀，應再次離心,。 

2. 血漿：應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）,。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心,。 

3. 尿液：用無菌管收集,，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實行,。 

4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清,。檢測細胞內的成份時，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液,，細胞濃度達到 100 萬/ml 左右,。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份,。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）,。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。 

5. 組織標本：切割標本后，稱取重量,。加入一定量的 PBS,，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?2-8℃的溫度,。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分,。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）,。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用,。 

6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融. 

7. 不能檢測含 NaN3 的樣品,，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔 10 孔,，在第一,、第二孔中分別加標準品 100μl,，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液 50μl,，混勻,；然后從第一孔、第二孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔,，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl,，混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉，再各取 50μl分別加到第五,、第六孔中,，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul,，混勻,；混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加到第七,、第八孔中,，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl,，混勻后從第七,、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液 50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，濃度分別為48pg/ml,32pg/ml, 16pg/ml, 8pg/ml, 4pg/ml）

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。 

3. 加酶：每孔加入酶標試劑 50ul,，空白孔除外,。 

4. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。 

5. 配液：將 30(48T 的 20 倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30(48T 的 20 倍)倍稀釋后備用,。 

6. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此重復 5 次，拍干,。 

7. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50ul,，再加入顯色劑 B50ul，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色 10 分鐘. 

8. 終止：每孔加終止液 50ul,，終止反應（此時藍色立轉黃色）。 

9. 測定：以空白孔調零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。 測定應在加終止液后 15分鐘以內進行。

注意事項

1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。 

2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果。 

3. 各步加樣均應使用加樣器,，并經常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在 5 分鐘內,，如標本數量多,，推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標準曲線,，最好做復孔,。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD值大于標準品孔第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定,，計算時請最后乘以總稀釋倍數（×n×5）,。 

5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。 

6. 底物請避光保存,。 

7. 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準. 

8. 所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。 

9. 本試劑不同批號組分不得混用。 

10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準,。

計算

以標準物的濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據樣品的 OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD 值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數,，即為樣品的實際濃度,。

試劑盒性能

1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數 R 值為 0.92 以上。

2.批內與批間應分別小于 9%和 15%

檢測范圍

0.8pg/ml -50pg/ml

上海牧榮生物科技有限公司

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