目錄:上海牧榮生物科技有限公司>>實驗試劑>>試劑盒>> JYM0218Mo小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA kit
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥,綜合 |
|---|
小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA kit，產(chǎn)品編碼：JYM0218Mo
小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA kit,，Mouse Tumor Necrosis Factor α (TNF-α)ELISA Kit
【實驗方法】雙抗體夾心法?
【種屬】小鼠
【檢測范圍】 見說明書
【檢測波長】450 nm
【樣本類型】血清,、血漿,、組織,、細胞上清及相關(guān)液體樣本
【反應時間】 1.5~2h
小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供科研使用。
本試劑盒用于體外定量檢測小鼠血清,、血漿,、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中腫瘤壞死因子α(TNF-α)的含量.
有效期：6個月
保存條件：2-8℃
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)水平,。用純化的小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入腫瘤壞死因子α(TNF-α),，再與HRP標記的腫瘤壞死因子α(TNF-α)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的腫瘤壞死因子α(TNF-α)呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)濃度.
試劑盒組成
樣本處理及要求
1.血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心,。
2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應該再次離心,。
3. 尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集,。離心 20 分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液,，細胞濃度達到 100 萬/ml 左右。通過反復凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后,，稱取重量,。加入一定量的 PBS，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標本勻漿充分,。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性.
操作步驟
1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔 10 孔,，在第一,、第二孔中分別加標準品 100μl，然后在第一,、第二孔中加標準品稀釋液 50μl,，混勻；然后從第一孔,、第二孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔,，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl,，混勻,；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉,，再各取 50μl分別加到第五、第六孔中,，再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul，混勻,；混勻后從第五,、第六孔中各取 50μl 分別加到第七、第八孔中,，再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl，混勻后從第七,、第八孔中分別取 50μl 加到第九,、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液 50μl,，混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為 50μl，濃度分別為 480 pg/ml,320 pg/ml, 160pg/ml, 80 pg/ml)
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為 5 倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
3. 加酶：每孔加入酶標試劑 50ul，空白孔除外,。
4. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。
5. 配液：將 30(48T 的 20 倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30(48T 的 20 倍)倍稀釋后備用。
6. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此重復 5 次，拍干,。
7. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50ul，再加入顯色劑 B50ul,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色 10 分鐘.
8. 終止：每孔加終止液 50ul,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
9. 測定：以空白孔調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
注意事項
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。
3. 各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在 5 分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,，最好做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD值大于標準品孔第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定,，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
6. 底物請避光保存,。
7. 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8. 所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9. 本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準.
計算
以標準物的濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的 OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD 值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度.
試劑盒性能
1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù) R 值為 0.92 以上,。
2.批內(nèi)與批間應分別小于 9%和 15%.
檢測范圍
8pg/ml -500pg/ml
上海牧榮生物科技有限公司
國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理,。
國外試劑的訂購?？商峁W美實驗室品牌的采購方案,。
提供加急物流處理，進口貨物,，最快交期1-2周,。
進出口貨物代理服務。
公司代理眾多有名生命科學領(lǐng)域的研究試劑,、儀器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers,， cstti，Click Chemistry tools,，Nanoprobes,，Ancell，NANOCS,，Ambeed, Inc,，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc,，Torrey Pines Biolabs,，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等,。
質(zhì)量保證,，所有產(chǎn)品都提供售后服務。付款方式靈活,。公司堅持“一站式"服務模式,，為客戶全面解決實驗、生產(chǎn),、開發(fā)需求,。公司整合國際與國內(nèi)資源，加強網(wǎng)絡建設(shè),，提高公司內(nèi)部運作效率,，為客戶提供方便、快捷的服務,。
公司突出創(chuàng)新思維,，提高工作效能，減低運作成本,，為客戶提供優(yōu)惠的價格,。
5
化工儀器網(wǎng)