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人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA Kit,，產(chǎn)品編碼：JYM0798Hu

人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA Kit，Human Lipopolysaccharide Binding Protein (LBP)

【實驗方法】雙抗體夾心法

【種屬】人

【檢測范圍】 見說明書

【檢測波長】450 nm

【樣本類型】血清,、血漿、組織,、細胞上清及相關(guān)液體樣本 

【反應(yīng)時間】 1.5~2h

人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供科研使用,。

本試劑盒用于體外定量檢測人血清、血漿,、組織,、細胞上清及相關(guān)液體樣本中脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)的含量。

有效期：6個月

保存條件：2-8℃

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)水平,。用純化的人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入脂多糖結(jié)合蛋白(LBP),，再與HRP標(biāo)記的脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原- 酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)濃度。

試劑盒組成

樣本處理及要求

1.血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心,。 

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后,，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)該再次離心,。 

3. 尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。胸腹水,、腦脊液參照實行,。 

4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。離心 20 分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液,，細胞濃度達到 100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后,，稱取重量,。加入一定量的 PBS，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用,。 

6. 標(biāo)本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融. 

7. 不能檢測含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10 孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品 100μl,，然后在第一,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混勻,；然后從第一孔,、第二孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉,，再各取 50μl分別加到第五,、第六孔中，再在第五,、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50ul,，混勻；混勻后從第五,、第六孔中各取 50μl 分別加到第七,、第八孔中，再在第七,、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,，混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九,、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl，混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉,。（稀釋后各孔加樣量都為 50μl,，濃度分別為 36ng/ml, 24ng/ml, 12ng/ml, 6ng/ml）

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）,、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為 5 倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。 

3. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50ul,，空白孔除外。 

4. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。 

5. 配液：將 30(48T 的 20 倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30(48T 的 20 倍)倍稀釋后備用,。 

6. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次,，拍干,。 

7. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50ul，再加入顯色劑 B50ul,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色 10 分鐘。

8. 終止：每孔加終止液 50ul,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。 

9. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。

注意事項

1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。 

2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。 

3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間最好控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。 

4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD 值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。 

5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。 

6. 底物請避光保存,。 

7. 嚴(yán)格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). 

8. 所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。 

9. 本試劑不同批號組分不得混用。 

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn),。

計算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的 OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的 OD 值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。

試劑盒性能

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值為 0.92 以上。

2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于 9%和 15%.

檢測范圍

0.6pg/ml -45pg/ml

上海牧榮生物科技有限公司

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