LeapWal PolyShooter 轉(zhuǎn)染試劑,，產(chǎn)品編碼：P09110。

LeapWal PolyShooter 轉(zhuǎn)染試劑,，

PolyShooterTM

Transfection Reagent

Polymer Reagent For Transfecting Common Cell Lines

Catalog Number：P09110

01/產(chǎn)品概述

細胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子導(dǎo)入真核細胞內(nèi)以改變其基因型或表型的一種技術(shù),。隨著分子生物學(xué)和細胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制基因功能的常規(guī)手段,，廣泛應(yīng)用于基因功能研究,、調(diào)控基因表達、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等領(lǐng)域,。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo),、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。其中化學(xué)介導(dǎo)方法因其兼具高效低毒,、方便快捷等優(yōu)點,，應(yīng)用廣泛,。化學(xué)介導(dǎo)方法包括經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法,、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法以及多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法,。

理想的細胞轉(zhuǎn)染方法應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細胞毒性小等優(yōu)點,。已有眾多文獻報道,，脂質(zhì)體本身會參與細胞生理活動，影響基因表達,，對研究數(shù)據(jù)產(chǎn)生一定程度的干擾,。同時，脂質(zhì)體會對目的細胞造成細胞毒性,，這種毒性是由其脂質(zhì)特性決定的,。市面上多種商業(yè)化的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑要求細胞鋪板密度較高，以90%-95%為佳,，這有助于減少陽離子脂質(zhì)體細胞毒性造成的影響,。但是，如果研究的基因要求比較長的表達時間,，例如細胞周期相關(guān)基因,，或者細胞表面蛋白，又或者轉(zhuǎn)染后續(xù)需要進行繼續(xù)培養(yǎng)和功能研究,，則不適合用脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑,。目前眾多的研究者和生物公司將新一代轉(zhuǎn)染試劑的開發(fā)聚焦在非脂質(zhì)體的聚合物上，以尋找更高效低毒,，同時對研究影響較小的轉(zhuǎn)染試劑,。

LeapWal PolyShooter 轉(zhuǎn)染試劑，即PolyShooter Transfection Reagent是一種基于陽離子高分子聚合物的新型轉(zhuǎn)染試劑,，適用于DNA,、RNA的轉(zhuǎn)染。其原理為帶正電的高分子聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團形成帶正電的復(fù)合物后,，與細胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用,，并通過內(nèi)吞作用進入細胞，隨后在胞質(zhì)中釋放,，實現(xiàn)外源核酸的細胞轉(zhuǎn)染,。

LeapWal PolyShooter 轉(zhuǎn)染試劑對多種常見細胞具有高水平轉(zhuǎn)染效率，具有高效低毒,、操作簡單,、重復(fù)性好等優(yōu)點。其*的配方使其可直接加入培養(yǎng)基中,，血清的存在不會影響轉(zhuǎn)染效率,，這樣可以減少去除血清對細胞的損傷,。同時，轉(zhuǎn)染后不需要除去PolyShooter Transfection Reagent-核酸復(fù)合物或更換新鮮培養(yǎng)基,，也可根據(jù)具體情況優(yōu)化轉(zhuǎn)染體系,。

02/產(chǎn)品組分

03/保存條件

冰袋（wet ice）運輸。4℃保存,，有效期6個月,。-30℃至-10℃保存，有效期12個月,，避免反復(fù)凍融,。

04/產(chǎn)品特點

優(yōu)秀的轉(zhuǎn)染效率——針對廣泛類型的細胞，均表現(xiàn)出優(yōu)秀的轉(zhuǎn)染效率和高重組蛋白表達水平

細胞毒性低——作用溫和,，能較好地實現(xiàn)高轉(zhuǎn)染效率與低細胞毒性之間的平衡

操作簡單——在血清存在時亦具有可靠的轉(zhuǎn)染效率,，轉(zhuǎn)染后無需去除復(fù)合物或更換新鮮培養(yǎng)基

高性價比——經(jīng)濟的價格，同時實現(xiàn)高效的轉(zhuǎn)染效果

05/適用范圍

PolyShooter Transfection Reagent采用陽離子高分子聚合物為主要成分,，適用于DNA,、RNA的轉(zhuǎn)染。

06/實驗流程概要

07/實驗步驟（以24孔板為例,，其他培養(yǎng)板加樣體積參考表一：轉(zhuǎn)染量度標(biāo)準(zhǔn)）

1: 準(zhǔn)備待轉(zhuǎn)染細胞

貼壁細胞：轉(zhuǎn)染前一天,，將消化后的細胞按照每孔0.3-2x105個細胞的量進行鋪板，使其在轉(zhuǎn)染時密度為50%-60%,。

懸浮細胞：轉(zhuǎn)染當(dāng)天,，配制轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物之前，在24孔板中進行細胞鋪板,，每500 µL生長培養(yǎng)基中加入2-5x105個細胞,。

? 細胞狀態(tài)會極大影響轉(zhuǎn)染效率，待轉(zhuǎn)染細胞應(yīng)處于良好生長狀態(tài),，建議使用生長處于指數(shù)期,、存活率大于90% 的細胞進行轉(zhuǎn)染。

2: 準(zhǔn)備PolyShooter轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物

（1）取1 μg質(zhì)粒加入到1.5 mL離心管中,，加入2.5 μL* PolyShooter 轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)?；旌希覝胤跤?分鐘,。

? * 轉(zhuǎn)染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響,，通常情況下,，DNA（μg）和 PolyShooter轉(zhuǎn)染試劑（μL）的用量比例為1：2.5,。建議初次使用時，可在1：2-1：5的范圍內(nèi)調(diào)整以優(yōu)化轉(zhuǎn)染效果,。

（2）往上述混合物中加入100 μL無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基（與培養(yǎng)體系一致,，且無血清無雙抗）,，輕輕混勻，在室溫下靜置30分鐘,，形成PolyShooter轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物,。

? PolyShooterTM轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物在室溫下4個小時內(nèi)保持穩(wěn)定。

3: 細胞轉(zhuǎn)染

給細胞更換新鮮的預(yù)熱的*培養(yǎng)基500 μL/孔,，將上述100 µL PolyShooter 轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物加入每孔細胞,，輕輕搖動培養(yǎng)板混勻。

? 對于懸浮細胞系：轉(zhuǎn)染5小時后,，可選擇加入PMA和/或PHA以提高CVM啟動子的活性并促進基因表達,。對于Jurkat細胞，PHA和PMA的終濃度分別為1 µg/mL和50 ng/mL,，可以提高CMV啟動子活性和基因表達,。對于K562細胞，只加入PMA足以提高啟動子活性,。

4. 分析轉(zhuǎn)染細胞

轉(zhuǎn)染細胞培養(yǎng)24-48小時后,，可根據(jù)實際情況用熒光檢測法、Western Blot,、RT-PCR,、ELISA、流式細胞術(shù),、報告基因等檢測轉(zhuǎn)染效果,，或加入篩選藥物進行穩(wěn)定細胞株的篩選。

08/注意事項

1. 核酸質(zhì)量：想要獲得最高的轉(zhuǎn)染效率和更低的細胞毒性,，應(yīng)選用高純度,、無菌、無污染,、無內(nèi)毒素的優(yōu)質(zhì)核酸,。質(zhì)粒中的內(nèi)毒素是轉(zhuǎn)染的大敵，內(nèi)毒素會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率顯著下降,，特別是對內(nèi)毒素敏感的細胞,，例如原代細胞、懸浮細胞,、造血細胞等,。推薦使用無內(nèi)毒素質(zhì)粒抽提試劑盒進行質(zhì)粒提取，保證質(zhì)粒A260/A280比值為1.8-2.0,。同時,，需合理計算質(zhì)粒用量，轉(zhuǎn)染過量的質(zhì)粒可能會導(dǎo)致細胞毒性甚至死亡,；

2. 細胞質(zhì)量：細胞狀態(tài)會極大影響轉(zhuǎn)染效率,，建議使用生長處于指數(shù)期、存活率大于90%的細胞進行轉(zhuǎn)染,；

3. 細胞密度：建議細胞傳代后12-24 h內(nèi),、細胞密度為50%-60% 時進行轉(zhuǎn)染。不同的細胞轉(zhuǎn)染實驗,，對細胞密度的要求不盡相同,。在進行不同核酸或不同細胞系的轉(zhuǎn)染時，需要根據(jù)說明書再次優(yōu)化實驗條件,。此外,，在實驗過程中保證相同的接種條件，確保實驗數(shù)據(jù)的可重復(fù)性,；

4. 質(zhì)粒與轉(zhuǎn)染試劑使用比例：對于大多數(shù)細胞系,，轉(zhuǎn)染復(fù)合物中DNA (μg)與PolyShooter Transfection Reagent (μL) 的比例在1：2至1：5之間，推薦比例為1:2.5,。想要獲得*的轉(zhuǎn)染結(jié)果,，需要對這一比例進行優(yōu)化，根據(jù)所轉(zhuǎn)染細胞及質(zhì)粒選擇適合的轉(zhuǎn)染比例,；

5. PolyShooter Transfection Reagent可用于有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染,，并且轉(zhuǎn)染前后不需要換培養(yǎng)基。但是,，制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時要求用無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑,，因為血清會影響復(fù)合物的形成；

6. 由于一些特殊培養(yǎng)基中的某些成分可能會抑制陽離子聚合物介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染,，因此有必要檢測特殊培養(yǎng)基與PolyShooter Transfection Reagent的相容性,；

7. 為了您的健康安全，請規(guī)范操作,，穿戴實驗服與手套開展實驗,；

8. 本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及治療,。

09/實驗案例分析

1: 轉(zhuǎn)染前一天,，將圖2所示9種狀態(tài)良好的細胞接種于24孔板，使其在轉(zhuǎn)染時密度約為50%,。

2: 按照每孔計量,，取1μg GFP質(zhì)粒加入到1.5 mL離心管中，加入2.5 μL PolyShooter Transfection Reagent與質(zhì)?；旌?，室溫孵育3 min后,，往混合物中加入100 μL無血清基礎(chǔ)DMEM培養(yǎng)基，輕輕混勻,，在室溫下靜置30 min，形成PolyShooter轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物,。

3: 給細胞更換新鮮的預(yù)熱的*培養(yǎng)基500 μL/孔,，將上述100 µL PolyShooter 轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物加入每孔細胞，輕輕搖動培養(yǎng)板混勻,。

4：轉(zhuǎn)染細胞培養(yǎng)48小時后,，用熒光顯微鏡檢測GFP綠色熒光蛋白表達情況，并拍照記錄,，實驗結(jié)果如圖2所示,。

圖2: 轉(zhuǎn)染細胞培養(yǎng)48小時后，用熒光顯微鏡檢測GFP綠色熒光蛋白表達情況

10/其他相關(guān)產(chǎn)品

上海牧榮生物科技有限公司

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