無血清細胞凍存液 Plus,，產品編碼：PZ210R,。

無血清細胞凍存液 Plus,，

Cell Freezing Medium Plus (1x)

Especially suitable for lymphocyte and stem cell cryopreservation

01/產品概述

細胞藥物作為繼化學藥,、生物藥之后出現的新型藥物在臨床上的應用越來越廣泛。尤其,，干細胞治療和免疫細胞治療在退行性,、損傷性、遺傳缺陷性疾病以及腫瘤的治療中具有巨大的優(yōu)勢和廣闊的發(fā)展前景,，而高效安全的細胞制劑是細胞治療中的關鍵因素,。在細胞培養(yǎng)中，細胞凍存是最關鍵環(huán)節(jié)之一,，尤其在細胞治療,、細胞存儲中對細胞凍存更有特殊要求。

傳統(tǒng)的程序降溫法使用的凍存液主要配方為培養(yǎng)基,、血清,、DMSO。血清大多采用胎牛血清,，含有動物源性物質,，成分復雜，血清中未知成分和病毒等感染物質會給凍存帶來影響與風險,。該方法在科研上廣泛使用,，但是顯然已經不能適應現今細胞治療的應用場景。

針對干細胞和免疫細胞的凍存,，LeapWalTM Biotech推出一款Cell Freezing Medium Plus (1x),，是一種化學成分明確、無動物源成分,、使用醫(yī)藥級原料的即用型細胞凍存液,，尤其適合淋巴細胞和干細胞的凍存。這款產品操作簡單,，無需程序降溫,，無動物源性蛋白,，不含血清，病毒,、病菌和支原體等污染可能性低,，不僅能有效、安全地保護細胞,，同時,，使用藥用級原料，所有成分均明確,，極大降低批次間差異,。適用于干細胞、免疫細胞以及大多數細胞系凍存,。

02/產品組分

03/保存條件

冰袋（wet ice）運輸,。4℃保存，有效期12個月,。若長期不用,，可-30℃至-10℃保存，有效期24個月,。

04/產品特點

即用型細胞凍存液,，無需程序降溫，可直接凍存于-80℃冰箱,，長期保存（>5年）

安全性高,，無動物源性蛋白，不含血清,，病毒,、病菌和支原體等污染可能性低

復蘇后的細胞存活率優(yōu)異，復蘇率高達90% 以上,，細胞活力好

使用藥用級原料，所有成分均明確,，極大降低批次間差異

05/實驗流程概要

06/實驗步驟

一：細胞凍存步驟

1. 選擇處于指數生長期的細胞,，按照常規(guī)方法收集貼壁細胞或懸浮細胞于離心管中。

2. 1000 rpm-2000 rpm,，離心5分鐘,，收集培養(yǎng)細胞沉淀，棄上清液,。

3. 加入適量4℃預冷的LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 重懸細胞,，制成細胞懸液。

? 按照細胞密度和所用細胞凍存管的尺寸計算所需凍存液的量,，推薦凍存密度：1x106 至5x106 cells/mL,。

4. 將細胞懸液分裝至已標記的凍存管中,，建議每管1mL或1.5mL。

5. 直接將細胞凍存管放入-80℃超低溫冰箱中,，可長期冷凍保存,。如果想放入液氮中長期保存，需先放入-80℃冰箱至少12小時,，方可移至液氮罐中長期保存,。

二：凍存細胞復蘇步驟

1. 在15 mL離心管中加入5-10 mL平衡至室溫的*培養(yǎng)基。

2. 從-80℃冰箱/液氮中取出凍存的細胞,，立即放入37℃水浴鍋或其他細胞復蘇設備中,，迅速解凍。

3. 將凍存管中的細胞懸液逐滴轉移至預先準備好的含*培養(yǎng)基的離心管中,，1000 rpm-1500 rpm,，離心5分鐘，收集細胞沉淀,，棄上清（操作時小心,，切勿將細胞沉淀移去）。

4. 加入適量平衡至室溫的*培養(yǎng)基重懸細胞,，接種到事先準備好的培養(yǎng)容器中,，輕輕搖晃培養(yǎng)容器，使細胞分布均勻,。

5. 鏡檢細胞后,，可根據各自研究的需要和方法進行細胞常規(guī)培養(yǎng)。培養(yǎng)5-24h后,，觀察細胞狀態(tài),，可視情況更換新鮮細胞培養(yǎng)液。

07/適用范圍

LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 適用于干細胞,、免疫細胞以及大多數細胞系凍存,。該款凍存液使用藥用級原料，化學成分明確,，適合細胞儲存,、細胞治療以及科學研究等不同場景使用。

08/質量控制

LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 通過嚴格的內毒素,、滲透壓,、pH測試和無菌檢測（細菌、真菌和支原體檢測）,。

09/注意事項

1. 若長期不用,，本產品可-30℃至-10℃保存，再次使用時,，請在2-8℃融化LeapWalTM  Cell Freezing Medium Plus(1x),，避免反復凍融,。

2. 使用LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 凍存細胞后，應盡量減少凍存細胞在外存放時間,，盡快移入-80℃超低溫冰箱長期保存,。

3. LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 尤其適合淋巴細胞或干細胞凍存，建議第一次使用本產品凍存細胞時,，先對其進行試驗性凍存,、復蘇、培養(yǎng)的預實驗,，確認性能后再進行正式凍存,。

4. 該產品在室溫條件下放置的時間不宜過長，以免影響凍存效率,。

5. 免責聲明: 本公司將不為任何不正當使用此產品所發(fā)生的意外負責,。

6. 為了您的健康安全，請規(guī)范操作,，穿戴實驗服與手套開展實驗,。

7. 本產品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及治療,。

10/實驗案例分析

一,、凍存細胞復蘇存活率檢測

1. 選擇處于對數生長期的淋巴細胞，按照常規(guī)方法收集細胞于離心管中,。

2. 1000 rpm,，離心5分鐘，收集培養(yǎng)細胞沉淀,，棄上清液,。

3. 加入適量4℃預冷的LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) 、K公司凍存液,、B公司凍存液分別重懸細胞,，制成細胞懸液。凍存密度為1x106 cells/mL,。

4. 將細胞懸液分裝至已標記的凍存管中,，每管1mL，放入-80℃冰箱中,，冷凍保存。

5. 凍存12個月后,，進行細胞復蘇,，對復蘇后的細胞進行臺盼藍染色，統(tǒng)計細胞存活率,。

二,、凍存細胞復蘇生長曲線檢測

1. 選擇處于對數生長期的淋巴細胞,，按照常規(guī)方法收集細胞于離心管中。

2. 1000 rpm,，離心5分鐘,，收集培養(yǎng)細胞沉淀，棄上清液,。

3. 加入適量4℃預冷的LeapWalTM Cell Freezing Medium Plus(1x) ,、K公司凍存液、B公司凍存液分別重懸細胞,，制成細胞懸液,。凍存密度為2x105 cells/mL。

4. 將細胞懸液分裝至已標記的凍存管中,，每管1mL,，放入-80℃冰箱中，冷凍保存,。

5. 凍存1個月后進行細胞復蘇,，對復蘇后的細胞進行臺盼藍染色，繪制生長曲線,。

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