Polybrene 聚凝胺 10mg/mL,，產(chǎn)品編碼：LE110。

Polybrene 聚凝胺 10mg/mL,，

Polybrene (10 mg/mL)

01/產(chǎn)品概述

Polybrene（聚凝胺,，hexadimethrine bromide）是一種多聚陽離子聚合物，廣泛用于逆轉(zhuǎn)錄病毒及慢病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染,，是一種常用的促感染試劑,，能夠顯著提高病毒與細(xì)胞的接觸及感染效率，其作用機(jī)理可能是通過中和細(xì)胞表面唾液酸與病毒顆粒之間的靜電排斥從而促進(jìn)吸附作用,。同時(shí),，Polybrene也常用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的DNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)以增強(qiáng)脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率。Polybrene也是一種有名的抗肝素劑（肝素拮抗劑）,，常用來生產(chǎn)非特異性凝集的紅細(xì)胞,。它還參與到低分子量DNA的轉(zhuǎn)化中。此外,，Polybrene也多用于蛋白測序,，因?yàn)樾┝康腜olybrene在自動(dòng)測序分析可明顯改善多肽的降解現(xiàn)象。PVDF膜加入polybrene還能提高膜的親和性,。

本產(chǎn)品以溶液形式提供,，粉末用 0.9% NaCl 配制成10 mg/mL的溶液，并用0.22 μm濾膜過濾除菌,。使用時(shí)一般按1:1000-1:5000稀釋,，依細(xì)胞種類不同稀釋比例不同,，具體使用濃度請(qǐng)查閱相關(guān)文獻(xiàn),。

02/產(chǎn)品組分

03/保存條件

冰袋（wet ice）運(yùn)輸。-20℃ 保存,，有效期24個(gè)月,。建議分裝保存，避免反復(fù)凍融,。

04/產(chǎn)品特點(diǎn)

v 即用型試劑,，無需進(jìn)行試劑配置，簡單方便,。

v 無菌制劑,，可直接加入細(xì)胞使用。

05/實(shí)驗(yàn)步驟

慢病毒感染（Lentiviral Infection）實(shí)驗(yàn)步驟如下：

1. 包裝慢病毒并測定慢病毒滴度,，通過病毒滴度和MOI計(jì)算目的細(xì)胞感染所需的病毒量,。

2. 實(shí)驗(yàn)前一天,，將生長狀態(tài)良好的目的細(xì)胞消化計(jì)數(shù)后稀釋至1-3×105/mL，加入12孔板,，1 mL/孔,。放入37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

? 懸浮細(xì)胞不需要提前一天接種,，實(shí)驗(yàn)前將細(xì)胞計(jì)數(shù)接種后，直接加入病毒混合液即可,。

3. 配制慢病毒+polybrene+培養(yǎng)基混合液,。polybrene一般使用濃度為2-10 μg/mL，但對(duì)某些細(xì)胞（如末端分化的神經(jīng)元,，DC細(xì)胞等）毒性較大,，初次使用建議先做毒性測試。

4. 吸去12孔板中目的細(xì)胞的培養(yǎng)基,，加入3中配制的慢病毒混合液,，放入37℃，5% CO2 培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。

? 感染懸浮細(xì)胞或半懸浮細(xì)胞,，則需采用平角離心轉(zhuǎn)染法，即將適量的病毒液加入細(xì)胞培養(yǎng)板后,，封好口,，放入平角離心機(jī)中，低速（200xg）離心?1 h?,，然后放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。

? 若實(shí)驗(yàn)條件有限，沒有平角離心機(jī),，可用離心管代替,，將細(xì)胞吸入離心管中，進(jìn)行低速離心,，去掉大部分上清,，加入適量的病毒液，室溫放置?15 min,，然后將細(xì)胞和病毒液同時(shí)吸出轉(zhuǎn)入培養(yǎng)板中繼續(xù)培養(yǎng),。

5. 病毒感染16 h后更換為新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

6. 病毒感染36-48 h后,，可加入篩選培養(yǎng)基進(jìn)行穩(wěn)定細(xì)胞株篩選,，或采用熒光顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù),、western blot,、qPCR等方法檢測目的基因表達(dá)情況,。

06/適用范圍

Polybrene目前廣泛用于逆轉(zhuǎn)錄病毒及慢病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染，是一種常用的促感染試劑,，能夠顯著提高病毒與細(xì)胞的接觸及感染效率,。

07/注意事項(xiàng)

1. Polybrene對(duì)某些細(xì)胞（如末端分化的神經(jīng)元、DC 細(xì)胞）毒性較大,，初次應(yīng)用建議先做毒性測試,。

2. 本說明書中提供的Polybrene使用濃度范圍僅供參考，具體使用濃度請(qǐng)參考相關(guān)文獻(xiàn),。

3. 為了您的健康安全,，請(qǐng)規(guī)范操作，穿戴實(shí)驗(yàn)服與手套開展實(shí)驗(yàn),。

4. 所有慢病毒操作均需在BSL2級(jí)生物安全柜中進(jìn)行,。

5. 本產(chǎn)品僅供科研使用，請(qǐng)勿用于臨床診斷及治療,。

08/實(shí)驗(yàn)案例分析

1. 提前一天使用10 cm細(xì)胞培養(yǎng)皿培養(yǎng)ViralStars Lentivirus Packaging Cell Line（CL110001）,，待細(xì)胞密度為75% 左右開始包裝慢病毒。

2. 使用ViralStars LP Lentivirus Packaging Kit（LP110-10）進(jìn)行慢病毒包裝,。取10 μL慢病毒包裝輔助質(zhì)?；旌衔铮≒ackage Plasmid Mix）加入到2 mL離心管中，加入2.5 μL表達(dá)GFP 的對(duì)照質(zhì)粒（Control Plasmid）,，輕輕混合,，加入32 μL PolyShooter轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒混合,，室溫孵育3分鐘,。

3. 往上述混合物中加入1.8 mL無血清無雙抗的DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基，輕輕混勻,，在室溫下靜置30分鐘,，形成轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物。

4. 將上述1.8 mL轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物輕輕地逐滴均勻加入10 cm皿慢病毒包裝細(xì)胞中,，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿混勻,，置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)產(chǎn)毒,。

5. 轉(zhuǎn)染24 h后，棄去初始病毒上清液,，加入10 mL新鮮的*培養(yǎng)基(DMEM +10% FBS)至10 cm細(xì)胞培養(yǎng)皿中,，置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng),。

6. 轉(zhuǎn)染48 h后,，收集病毒上清液,，再加入10 mL新鮮的*培養(yǎng)基(DMEM +10% FBS)至10 cm細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃,，5% CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng),。

7. 轉(zhuǎn)染72 h后，進(jìn)行二次病毒上清液收集,，與48 h收集的上清液混合后,，300xg離心10分鐘以除去細(xì)胞碎片，0.22 μm濾器過濾,，使用ViralStars LC Lentivirus Concentration Solution慢病毒濃縮試劑盒（LC110R）進(jìn)行20倍濃縮,，使用1 mL ViralStars LS Lentivirus Storage Solution（LS110R）重懸慢病毒顆粒。

8. 使用上述制備的慢病毒感染目的細(xì)胞HEK293T,，設(shè)置兩組實(shí)驗(yàn)組: (1) 病毒+polybrene (10 μg/mL)+培養(yǎng)基混合液,，(2) 病毒+培養(yǎng)基混合液(不添加polybrene)。

9. 使用熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白表達(dá)情況,，并拍照記錄,。使用流式細(xì)胞術(shù)統(tǒng)計(jì)GFP陽性細(xì)胞數(shù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示,。

圖2: 慢病毒(GFP)感染目的細(xì)胞HEK293T的過程中是否添加polybrene (10 μg/mL)的感染效率對(duì)比實(shí)驗(yàn),。

09/其他相關(guān)產(chǎn)品

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