PolyShooter NEO-PEI DNA 轉(zhuǎn)染試劑,，產(chǎn)品編碼：P09310-500,。

PolyShooter NEO-PEI DNA 轉(zhuǎn)染試劑

PolyShooterTM

NEO-PEI Transfection Reagent

DNA transfection reagent for large scale recombinant protein expression and virus production

Catalog Number：P09310

01/產(chǎn)品概述

PEI是基因轉(zhuǎn)染中常用的高分子載體，同時(shí)也是基因轉(zhuǎn)染的“金標(biāo)準(zhǔn)",。PEI轉(zhuǎn)染的原理是帶正電的陽離子聚合物與核酸中帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后,，再與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用，通過細(xì)胞胞吞進(jìn)入細(xì)胞,。PEI主鏈上每三個(gè)原子就含有一個(gè)氮原子,，因此具有較高的陽離子密度，這對(duì)于結(jié)合帶負(fù)電荷的核酸分子是非常有利的,。在生理pH條件下,，PEI部分胺基被質(zhì)子化，隨著體系pH值的降低,，PEI剩余的胺基被質(zhì)子化,，從而賦予了其出色的核酸結(jié)合能力和質(zhì)子緩沖能力，有利于通過質(zhì)子海綿效應(yīng)從內(nèi)涵體逃逸,。但是,，PEI高的陽離子電荷密度，導(dǎo)致其嚴(yán)重的細(xì)胞毒性,。同時(shí),，PEI 25K含有4%-11％的殘留丙酰基,，這可能阻礙聚合物主鏈與DNA的有效結(jié)合,，影響基因轉(zhuǎn)染效率。因此,，針對(duì)PEI的研究工作主要聚焦在通過功能化修飾以及脫丙?；瑏硖岣咿D(zhuǎn)染效率,、降低細(xì)胞毒性,。

LeapWal PolyShooter NEO-PEI DNA 轉(zhuǎn)染試劑是一種基于分子量25 kDa PEI的DNA轉(zhuǎn)染試劑。通過對(duì)PEI進(jìn)行功能改性，NEO-PEI 丙?；?脫落,，顯著改善了PEI的基因遞送性能，表現(xiàn)出較好的穩(wěn)定性和較低的細(xì)胞毒性,。PolyShooter NEO-PEI與PEI 25000轉(zhuǎn)染試劑相比,，具有很多優(yōu)點(diǎn)。包括：

1. PolyShooter NEO-PEI為即用型轉(zhuǎn)染試劑,，無需配置,，可直接用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，而PEI 25000需要先把水調(diào)成弱酸性助其溶解,，溶解后再用NaOH把pH調(diào)至中性,，配置過程繁瑣復(fù)雜，容易引入誤差導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定,。PEI 40000雖然較PEI 25000更易溶解,，但也同樣存在配置繁瑣，配置過程中容易引入誤差的風(fēng)險(xiǎn),。

2. PEI 25000含有4%-11%的丙?；鶜埩簦,；鶗?huì)阻止聚合物主鏈與DNA結(jié)合,，影響轉(zhuǎn)染效果。相較于PEI 25000,，PolyShooter NEO-PEI丙?；?脫落，因此其性能始終高效如一,。

LeapWal PolyShooter NEO-PEI DNA 轉(zhuǎn)染試劑是一種功能強(qiáng)大,、值得信賴且經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染試劑，廣泛適用于多種細(xì)胞系,，包括HEK-293,、HEK-293T、CHO-K1,、COS-1,、COS-7、NIH/3T3,、Sf9,、HepG2和HeLa細(xì)胞等。同時(shí),，PolyShooter NEO-PEI轉(zhuǎn)染試劑在大規(guī)模重組蛋白表達(dá)和病毒生產(chǎn)等領(lǐng)域有著高效,、低毒,、穩(wěn)定、可靠等顯著優(yōu)勢,。PolyShooter NEO-PEI提供從96孔板到200L生物反應(yīng)器持續(xù)的高表達(dá)轉(zhuǎn)染體系,，實(shí)現(xiàn)從新藥研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的輕松過度。與大多數(shù)細(xì)胞轉(zhuǎn)染方案相比,，使用PolyShooter NEO-PEI既能得到穩(wěn)定的基因表達(dá)效率,，又可顯著降低轉(zhuǎn)染成本。

02/產(chǎn)品組分

03/保存條件

冰袋（wet ice）運(yùn)輸,。4℃保存,，有效期6個(gè)月,。-30℃至-10℃保存,，有效期12個(gè)月，避免反復(fù)凍融,。

04/產(chǎn)品特點(diǎn)

v 易于使用——即用型轉(zhuǎn)染試劑,，無需配置，可直接用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)

v 轉(zhuǎn)染效率高——針對(duì)多種類型細(xì)胞,，均表現(xiàn)出優(yōu)秀的轉(zhuǎn)染效率和高重組蛋白表達(dá)

v 細(xì)胞毒性低——作用溫和,，能更好地實(shí)現(xiàn)高轉(zhuǎn)染效率與低細(xì)胞毒性之間的平衡

v 性能更穩(wěn)定——丙酰基*脫落,，性能始終高效如一

v 高性價(jià)比——既能得到穩(wěn)定的基因表達(dá)效率,，又可顯著降低轉(zhuǎn)染成本

v 化學(xué)成分明確，不含動(dòng)物來源成分

05/適用范圍

PolyShooter NEO-PEI Transfection Reagent廣泛適用于多種細(xì)胞系的DNA轉(zhuǎn)染,，可應(yīng)用于大規(guī)模重組蛋白表達(dá)和病毒生產(chǎn)等領(lǐng)域,。本試劑提供從96孔板到200L生物反應(yīng)器持續(xù)的高表達(dá)轉(zhuǎn)染體系，實(shí)現(xiàn)從新藥研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的輕松過度,。

06/實(shí)驗(yàn)流程概要

圖1: PolyShooter NEO-PEI Transfection Reagent轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)流程圖

07/實(shí)驗(yàn)步驟（以24孔板為例,，其他培養(yǎng)板加樣體積參考表一：轉(zhuǎn)染量度標(biāo)準(zhǔn)）

1: 準(zhǔn)備待轉(zhuǎn)染細(xì)胞

貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天，將消化后的細(xì)胞按照每孔0.3-2x105個(gè)細(xì)胞的量進(jìn)行鋪板,，使其在轉(zhuǎn)染時(shí)密度為60%-70%,。

懸浮細(xì)胞：轉(zhuǎn)染當(dāng)天，配制轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物之前,，在24孔板中進(jìn)行細(xì)胞鋪板,，每500 µL生長培養(yǎng)基中加入2-5x105個(gè)細(xì)胞。

? 細(xì)胞狀態(tài)會(huì)極大影響轉(zhuǎn)染效率,，待轉(zhuǎn)染細(xì)胞應(yīng)處于良好生長狀態(tài),，建議使用生長處于指數(shù)期、存活率大于90% 的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。

2: 準(zhǔn)備PolyShooter NEO-PEI轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物

（1）取1 μg質(zhì)粒加入到1.5 mL離心管中,，加入2.5 μL* PolyShooter NEO-PEI轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)?；旌希覝胤跤?分鐘,。

? * PolyShooter NEO-PEI轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類型及其他實(shí)驗(yàn)條件影響,，通常情況下，DNA（μg）和PolyShooter NEO-PEI轉(zhuǎn)染試劑（μL）的推薦使用比例為1：2.5,。建議初次使用時(shí),，可在1：1-1：5的范圍內(nèi)調(diào)整以優(yōu)化轉(zhuǎn)染效果。

（2）往上述混合物中加入100 μL無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基1（與培養(yǎng)體系一致,，且無血清無雙抗）,，輕輕混勻，在室溫下靜置30分鐘,，形成轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物,。

? PolyShooter NEO-PEI轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物在室溫下4個(gè)小時(shí)內(nèi)保持穩(wěn)定。

（3）30分鐘后,，往轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物中加入150 μL無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基2（與培養(yǎng)體系一致,，且無血清無雙抗）稀釋復(fù)合物。

3: 細(xì)胞轉(zhuǎn)染

棄去細(xì)胞培養(yǎng)基,，將上述250 µL轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物加入每孔細(xì)胞,，轉(zhuǎn)染4-16小時(shí)后，給細(xì)胞補(bǔ)充新鮮生長培養(yǎng)基500 µL/孔,。

4: 分析轉(zhuǎn)染細(xì)胞

轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)36-48小時(shí)后,，可根據(jù)實(shí)際情況用熒光檢測法、Western Blot,、RT-PCR,、ELISA、流式細(xì)胞術(shù),、報(bào)告基因等檢測轉(zhuǎn)染效果,，或加入篩選藥物進(jìn)行穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選。

表一：轉(zhuǎn)染量度標(biāo)準(zhǔn)

08/注意事項(xiàng)

1: 核酸質(zhì)量：想要獲得最高的轉(zhuǎn)染效率和更低的細(xì)胞毒性,，應(yīng)選用高純度,、無菌、無污染,、無內(nèi)毒素的優(yōu)質(zhì)核酸,。質(zhì)粒中的內(nèi)毒素是轉(zhuǎn)染的大敵，內(nèi)毒素會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率顯著下降,。推薦使用無內(nèi)毒素質(zhì)粒抽提試劑盒進(jìn)行質(zhì)粒提取,，保證質(zhì)粒A260/A280比值為1.8-2.0。同時(shí),，需合理計(jì)算質(zhì)粒用量,，轉(zhuǎn)染過量的質(zhì)?？赡軙?huì)導(dǎo)致細(xì)胞毒性甚至死亡；

2: 細(xì)胞質(zhì)量：細(xì)胞狀態(tài)會(huì)極大影響轉(zhuǎn)染效率,，建議使用生長處于指數(shù)期,、存活率大于90%的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染；

3: 細(xì)胞密度：建議細(xì)胞傳代后12-24 h內(nèi),、細(xì)胞密度為60%-70% 時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。不同的細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，對(duì)細(xì)胞密度的要求不盡相同,。在進(jìn)行不同核酸或不同細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染時(shí),，需要根據(jù)說明書再次優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。此外,，在實(shí)驗(yàn)過程中保證相同的接種條件,，確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可重復(fù)性；

4: 質(zhì)粒與轉(zhuǎn)染試劑使用比例：對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞系,，轉(zhuǎn)染復(fù)合物中DNA (μg)與PolyShoote NEO-PEI Transfection Reagent (μL) 的比例在1：1至1：5之間,，推薦比例為1:2.5,。想要獲得*的轉(zhuǎn)染結(jié)果,，需要對(duì)這一比例進(jìn)行優(yōu)化，根據(jù)所轉(zhuǎn)染細(xì)胞及質(zhì)粒選擇適合的轉(zhuǎn)染比例,；

5: PolyShooter NEO-PEI Transfection Reagent也可用于有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染,，但通過我們實(shí)驗(yàn)室的測試，我們認(rèn)為體系中血清的存在會(huì)對(duì)轉(zhuǎn)染效果有一定程度的干擾,，所以,，為了追求更高效的轉(zhuǎn)染效率，我們更推薦使用無血清轉(zhuǎn)染法（即“07/實(shí)驗(yàn)步驟"中敘述的轉(zhuǎn)染方法）,；

6: 由于一些特殊培養(yǎng)基中的某些成分可能會(huì)抑制陽離子聚合物介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染,，因此有必要檢測特殊培養(yǎng)基與PolyShooter NEO-PEI Transfection Reagent的相容性；

7: 為了您的健康安全,，請(qǐng)規(guī)范操作,，穿戴實(shí)驗(yàn)服與手套開展實(shí)驗(yàn)；

8: 本產(chǎn)品僅供科研使用,，請(qǐng)勿用于臨床診斷及治療,。

09/實(shí)驗(yàn)案例分析

1: 轉(zhuǎn)染前一天，將圖2所示3種狀態(tài)良好的細(xì)胞接種于24孔板,，使其在轉(zhuǎn)染時(shí)密度為60%-70%,。

2: 按照每孔計(jì)量，取1μg GFP質(zhì)粒加入到1.5 mL離心管中,，PolyShooter NEO-PEI組（圖2上）加入2.5 μL PolyShooter NEO-PEI Transfection Reagent與質(zhì)?；旌?，PEI組（圖2下）加入2.5 μL PEI 25k與質(zhì)粒混合,。室溫孵育3分鐘后,，往混合物中加入100 μL無血清基礎(chǔ)DMEM培養(yǎng)基，輕輕混勻,，在室溫下靜置30分鐘,，形成轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物。

3: 孵育30分鐘后,，往轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物中加入150 μL無血清基礎(chǔ)DMEM培養(yǎng)基稀釋復(fù)合物,。

4: 將細(xì)胞培養(yǎng)基棄去，加入上述250 µL 轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物,。

5: 轉(zhuǎn)染12小時(shí)后,，給細(xì)胞補(bǔ)充新鮮生長培養(yǎng)基500 µL/孔。

6: 轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)48小時(shí)后,，用熒光顯微鏡檢測GFP綠色熒光蛋白表達(dá)情況,，并拍照記錄，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示,。

圖2: 轉(zhuǎn)染細(xì)胞48小時(shí)后,，用熒光顯微鏡檢測GFP綠色熒光蛋白表達(dá)情況

10/其他相關(guān)產(chǎn)品

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

2. 國外試劑的訂購,?？商峁W美實(shí)驗(yàn)室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理,，進(jìn)口貨物,，最快交期1-2周。

4. 進(jìn)出口貨物代理服務(wù),。

5. 公司代理眾多有名生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑,、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti,，Click Chemistry tools,，Nanoprobes，Ancell,，NANOCS,，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC,，Tulip Biolabs, Inc,，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs,，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點(diǎn)合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等,。

6. 質(zhì)量保證,，所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活,。公司堅(jiān)持“一站式"服務(wù)模式,，為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn),、開發(fā)需求,。公司整合國際與國內(nèi)資源，加強(qiáng)網(wǎng)絡(luò)建設(shè),，提高公司內(nèi)部運(yùn)作效率,，為客戶提供方便、快捷的服務(wù),。

7. 公司突出創(chuàng)新思維,，提高工作效能，減低運(yùn)作成本,，為客戶提供優(yōu)惠的價(jià)格,。

雙雙寬迷你垂直系統(tǒng) CE，2 位,。 雙倍容量標(biāo)準(zhǔn)尺寸的雙單元,，運(yùn)行相當(dāng)于 4 標(biāo)準(zhǔn)迷你凝膠。 包括 2 個(gè)您選擇的梳子,，2 個(gè)玻璃板套,，2 個(gè)墊片套，2 個(gè)用于鑄造的凝膠包裹墊圈,。玻璃板尺寸為 20 厘米 x 10 厘米（h）。 對(duì)于迷你 SDS PAGE,，迷你二維電泳,。