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1.PNA具有較高的親和力和特異性,。

2.富含嘌呤的PNA低聚物的溶解度降低，并傾向于聚集,。建議低聚物的嘌呤含量低于50%,，在PNA夾中一個低聚物的嘌呤（特別是G堿段不超過6段），因為水溶性非常重要,?？梢蕴砑觾蓚€賴氨酸來提高長PNA或具有高嘌呤的PNA的溶解度,。

存儲 和 處理

1.PNA作為凍干粉（超過5年）或作為水中溶液（至少一年）儲存起來非常穩(wěn)定-20°或更低,。對于長期存儲，-70°

2.當(dāng)準(zhǔn)備使用時,，向下旋轉(zhuǎn)試管,，將50n摩爾的PNA溶解在1 ml無菌水中，制成50 uM的原液,。渦旋和混合良好,，以

實現(xiàn)*全溶解。

3.平均分配和儲存在-20°或-70°工作原液可以進一步稀釋10倍（5毫米,，10倍）,，并在4度下保存幾周。

4.當(dāng)PNA解凍時,，加熱至55°中浸泡5分鐘,，以實現(xiàn)*全溶解。

PCR 反應(yīng)

*下面是一個例子,。實際情況可能根據(jù)序列而變化,，需要根據(jù)經(jīng)驗來確定。

1.準(zhǔn)備以下PCR混合,。

a.25 ul 2x PCR混合物

b.FW和RV PCR引物分別為最終0.2 uM

c.5 ul PNA鉗夾（5 uM庫存）至最終0.5uM（范圍：0.2~5 uM）

d.DNA模板： 20 ng（10~50 ng）

e.水至50 ul

2.按如下方法運行PCR程序,。

a.變性：94度 3 min

b.放大(22~40循環(huán)）

i.變性：94度 30 sec

ii.PNA夾具：65~75度為20秒（比PNA工具計算的Tm低5~10度）

iii.底漆退火：55~65度為20秒

iv.擴展：68度為30秒

c.擴展：72度, 10 min

d.保持在4度

3.取5ulPCR產(chǎn)物，在瓊脂糖凝膠上運行,。

4.夾緊反應(yīng)中最常見的PNA濃度為0.4~2 uM,。一般來說，如果溶解度不受影響,，更高濃度的PNA可以提供更好的夾緊效果,。