交聯(lián)劑包含至少兩個反應性基團，它們對包括巰基和胺在內(nèi)的許多基團具有反應性,，并在兩個或多個分子之間產(chǎn)生化學共價鍵,。可用交聯(lián)劑靶向的官能團是伯胺,、羧基,、巰基、碳水化合物和羧酸,。蛋白質(zhì)分子具有許多這樣的官能團,，因此蛋白質(zhì)和肽可以使用交聯(lián)劑容易地結合,。交聯(lián)劑用于研究蛋白質(zhì)結構和功能，將蛋白質(zhì)錨定在固體支持物上,，制備免疫原,、免疫毒素和其他結合的蛋白質(zhì)試劑。
交聯(lián)劑可以根據(jù)反應性基團的數(shù)量和相似性分成幾組:
• 同雙功能具有兩個相同的反應端,。
• 異雙功能具有兩個不同的反應端,。
同雙官能交聯(lián)劑用于一步反應,，而異雙官能交聯(lián)劑用于兩步連續(xù)反應,，其中最不穩(wěn)定的反應末端首先反應。同雙官能交聯(lián)劑具有導致自結合,、聚合和細胞內(nèi)交聯(lián)的趨勢,。另一方面，異雙官能試劑允許更可控的兩步反應,，這使得不希望的分子內(nèi)交叉反應和聚合反應最小化,。
廣泛使用的異雙功能交聯(lián)劑用于通過胺和巰基偶聯(lián)蛋白質(zhì)。最不穩(wěn)定的胺反應性NHS-酯首先偶聯(lián),，在除去未偶聯(lián)的試劑后,，繼續(xù)偶聯(lián)巰基。巰基反應基團通常是馬來酰亞胺,、吡啶基二硫化物和α-鹵代乙?；Ｆ渌宦?lián)劑包括碳二亞胺,，它連接羧基(-COOH)和伯胺(-NH2),。存在具有一個光反應性末端的異雙官能交聯(lián)劑。光反應性基團在沒有特定基團可與之反應時使用,，因為光反應性基團在暴露于紫外光時會發(fā)生非特異性反應,。
通常希望最小化由于交聯(lián)反應引起的結構變化的程度,，如果蛋白質(zhì)分子具有生物活性則更是如此,。因此，交聯(lián)是在溫和的緩沖液和pH條件下進行的,。根據(jù)應用,，結合程度也很重要，并且必須保持最佳的交聯(lián)劑與蛋白質(zhì)的比例,。蛋白質(zhì)外表面上目標基團的數(shù)量也很重要,。如果暴露的目標基團易于結合；可以使用較低的交聯(lián)劑與蛋白質(zhì)的比率,。
交聯(lián)劑具有不同的間隔臂長度,。當兩個目標基團相距較遠時，可以使用具有較長間隔臂的交聯(lián)劑,。具有不同間隔臂的交聯(lián)劑的可用性使得交叉反應效率更優(yōu)化,。具有短間隔臂的交聯(lián)劑適用于分子內(nèi)交聯(lián)?？汕懈畹慕宦?lián)劑也是可用的,，這擴展了蛋白質(zhì)分析的范圍。
蛋白質(zhì)交聯(lián)劑的選擇
當選擇交聯(lián)劑時,，要考慮以下特征:
1.試劑溶解度
2.反應基團的性質(zhì)
3.同雙功能或異雙功能
4.光反應性或熱反應性基團
5.間隔臂的長度
6.共軛產(chǎn)物可裂解與否
7.進一步標記的可能性
8.結合所需的反應條件
Double Do交聯(lián)劑
G-Biosciences提供多種交聯(lián)劑作為Double Do交聯(lián)劑,。Double Do交聯(lián)劑系列產(chǎn)品包括化學交聯(lián)劑、由特定反應緩沖液組成的支持附件、完整的反應系統(tǒng),、選擇指南和方案,。
為了選擇交聯(lián)劑,，需要考慮幾個因素:
• 反應方向:確定要交聯(lián)的目標殘基,，選擇不干擾蛋白質(zhì)功能的試劑。
• 膜滲透性:對于細胞表面標記,，選擇非膜滲透性試劑。
• 劈得開的:便于從固體支持物上釋放交聯(lián)蛋白或用于進一步的下游應用,。
• 可逆的:可裂解試劑的替代物是可逆試劑。例如,，ANB-NOS是通過光解作用釋放的,。
• 空間阻礙:結合位點周圍的大基團可能需要具有更長間隔臂的試劑,。
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