Cytion 為細胞系培養(yǎng)提供全面的指南，強調(diào)無菌和無菌技術(shù)的重要性,。我們的方案可確保在一系列細胞類型和應(yīng)用中成功進行細胞培養(yǎng),。
設(shè)計組織培養(yǎng)實驗室需要周密的規(guī)劃,，以確保在安全高效的環(huán)境中生產(chǎn)高質(zhì)量的材料。最佳設(shè)施包括用于檢疫和處理未受污染材料的不同區(qū)域,，每個區(qū)域都有專用的培養(yǎng)箱,。當(dāng)空間不允許按區(qū)域分開時，建議在時間上分開處理不同的材料,。嚴格的清潔方案和至少遵守 2 類密封水平對于最大限度地降低污染風(fēng)險和維持受控的實驗室環(huán)境至關(guān)重要,。
引擎蓋實踐：通過正確定位引擎蓋窗扇并避免雜亂來保持層流氣流。
滅菌：移液器吸頭,、玻璃移液器等高壓滅菌工具,，并使用70%乙醇進行表面消毒。
培養(yǎng)基選擇：查閱我們詳細的培養(yǎng)基圖表,，將您的細胞系與適當(dāng)?shù)?DMEM 或 RPMI 培養(yǎng)基相匹配,，并輔以胎牛血清 (FBS) 和谷氨酰胺等添加劑。
補充劑的無菌性：所有培養(yǎng)基和補充劑必須無菌,，必要時采用過濾滅菌,。
個人防護裝備：在細胞培養(yǎng)實驗室中，最大限度地減少傷害依賴于嚴格遵守個人防護裝備,，例如符合 EN374-3 標準的手套,。
消毒：最大限度地減少傷害還取決于正確使用次氯酸鈉或乙醇等消毒劑。為了實驗室衛(wèi)生的全面安全性和有效性,，下表詳細介紹了其他消毒劑及其具體使用案例：
消毒劑 | 有效對抗 | 專注 | 局限性 | 防范措施 |
次氯酸鈉 | 廣譜,，包括病毒 | 表面 1000 ppm，移液器 2500 ppm,，廢物/溢出物 10,000 ppm | 對金屬有腐蝕性,，被有機物鈍化 | 應(yīng)每日新鮮制作，不可用于金屬表面 |
乙醇 | 細菌,、大多數(shù)病毒 | 70% | 對無包膜病毒無效 | 在通風(fēng)良好的地方使用,，避免皮膚長時間接觸 |
異丙醇 | 細菌 | 60-70% | 對病毒無效 | 在通風(fēng)良好的地方使用，避免皮膚長時間接觸 |
甲醛 | 廣譜,，用于熏蒸 | 變化（以汽化形式用于熏蒸） | 有刺激性,、致敏性、需要通風(fēng) | 避免暴露,，熏蒸前去除次氯酸鹽 |
4. 培養(yǎng)環(huán)境設(shè)置
用于貼壁細胞系的燒瓶：經(jīng)過組織培養(yǎng)處理的燒瓶通常足以容納大多數(shù)細胞系,。對于需要額外支持的某些細胞類型，可以對燒瓶進行預(yù)處理或用明膠或纖連蛋白等底物包被,。這些涂層可以顯著改善細胞附著和增殖,。詳細的制備和包衣方案可在相應(yīng)的產(chǎn)品信息表中找到。
用于懸浮細胞系的燒瓶：使用專為非貼壁細胞設(shè)計的燒瓶,，可使其自由移動和充分的氣體交換,。這些燒瓶不需要促進細胞附著的表面處理,。
維持細胞培養(yǎng)的健康是細胞培養(yǎng)工作的一個重要方面。持續(xù)監(jiān)測對于確保實驗結(jié)果的完整性和可重復(fù)性至關(guān)重要,。以下是監(jiān)測細胞健康狀況的詳細做法：
顯微鏡評估：每天使用顯微鏡檢查細胞,，評估細胞健康的關(guān)鍵指標，包括一致的細胞附著,、特征形態(tài)和預(yù)期的生長模式,。尋找細胞大小和形狀的均勻性、是否存在不同的細胞核以及是否缺乏可能表明細胞死亡的顆粒度,。
生長率監(jiān)測：跟蹤增殖率,，確保其與細胞系的預(yù)期倍增時間一致。生長速率的突然變化可能表明細胞健康或培養(yǎng)條件存在潛在問題,。
培養(yǎng)基評估：檢查培養(yǎng)基的顏色,，它可以指示 pH 值的變化。泛黃的培養(yǎng)基表明酸度增加,，通常是細胞代謝或細菌污染的副產(chǎn)品,，而紫色或粉紅色調(diào)則表明更堿性的環(huán)境。
污染指標：警惕污染跡象,，例如培養(yǎng)基渾濁,、意外的 pH 變化或微生物菌落的存在。污染物可以是細菌,、真菌或病毒,，每種類型都有不同的視覺線索，例如細菌膜或真菌菌絲,。
形態(tài)異常：如果細胞表現(xiàn)出與正常生長或分化無關(guān)的持續(xù)形態(tài)異常變化,，則可能需要丟棄培養(yǎng)物。這包括廣泛的細胞變圓,、脫離或細胞碎片的存在。
不可逆應(yīng)激跡象：尋找不可逆應(yīng)激或毒性的跡象,，例如空泡形成,、膜起泡或凋亡小體。這些通常是細胞死亡的前兆,，并可能影響實驗結(jié)果,。
生長條件退化：如果培養(yǎng)物已達到匯合或過度生長，導(dǎo)致營養(yǎng)耗盡和廢物積累,，則應(yīng)將培養(yǎng)物進行傳代培養(yǎng)或丟棄,，以避免對細胞健康產(chǎn)生負面影響。
傳代培養(yǎng)或分裂細胞是細胞培養(yǎng)的常規(guī)部分,，涉及將細胞培養(yǎng)物的一部分轉(zhuǎn)移到新鮮的生長培養(yǎng)基中以繁殖培養(yǎng)物,。仔細的規(guī)劃和執(zhí)行對于此過程的成功至關(guān)重要,。以下是一些有效傳代的增強策略：
計劃分割
最佳分流比：根據(jù)細胞系特征、生長速率和培養(yǎng)物的預(yù)期用途確定理想分流比,。對于快速生長的細胞,，這可能涉及 1:2 的分割；對于生長較慢的細胞系,，可能需要 1:10 的分割,。
供應(yīng)商規(guī)格：請參閱供應(yīng)商的產(chǎn)品表，了解針對每個細胞系的具體建議,，其中通常包括詳細的傳代培養(yǎng)方案和細胞所需的條件,。
培養(yǎng)的連續(xù)性：維護主細胞庫并使用一致的傳代培養(yǎng)程序，以確保細胞系的壽命和遺傳穩(wěn)定性,。
及時補充營養(yǎng)：應(yīng)在細胞耗盡必需營養(yǎng)之前更換培養(yǎng)基,，這對于細胞的生長和代謝功能至關(guān)重要。
pH 值和毒素控制：定期改變可防止代謝副產(chǎn)物的積累并維持對細胞健康至關(guān)重要的生理 pH 值,。
傳代限制：保留細胞傳代的詳細日志,。頻繁傳代會導(dǎo)致遺傳漂變，從而改變細胞表型和行為,。通過限制傳代次數(shù),，可以保持細胞系的遺傳穩(wěn)定性和完整性。
傳代數(shù)記錄：每次細胞傳代培養(yǎng)時,，記錄傳代數(shù),。該信息對于跟蹤細胞系歷史和識別細胞行為中潛在的傳代相關(guān)變化至關(guān)重要。
驗證記錄：定期驗證細胞系身份（例如,，通過短串聯(lián)重復(fù)（STR）分析）并在記錄中對此進行注釋,，以確保在整個實驗中使用正確的細胞系。
突變監(jiān)測：如果可能,，監(jiān)測可能表明遺傳漂變或細胞系污染的關(guān)鍵遺傳或表型變化,，并保存這些記錄以供參考。
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