最規(guī)則和帶電的肽
要確定溶解肽的合適方法,,請(qǐng)僅使用少量合適的溶劑。將肽溶解在蒸餾水或去離子無(wú)菌水中(如果可能,,無(wú)氧),。只有當(dāng)肽溶解后,才應(yīng)添加所需的緩沖鹽/溶液,,并將溶液稀釋至最終濃度,,即先溶解肽,然后添加緩沖液,。
肽溶液中可能發(fā)生細(xì)菌降解,。
始終使用無(wú)菌水溶解肽。
如果需要,,可以通過(guò) 0.45 um 或 0.2 um 過(guò)濾器過(guò)濾肽溶液,。不要將肽溶液保存在室溫下。
半胱氨酸,、蛋氨酸或色氨酸等氨基酸容易氧化,,應(yīng)溶解并儲(chǔ)存在無(wú)氧水中。這可以通過(guò)在減壓下通過(guò)保留惰性氣體如氮?dú)?、氦氣或氬氣進(jìn)行脫氣來(lái)制備,。
如果肽不溶于純水,超聲處理可能有助于分解任何顆粒并提高溶解速度,。
注意:超聲處理會(huì)導(dǎo)致溶液升溫和肽降解,。
對(duì)于高堿性肽
如果肽含有許多堿性氨基酸(K、R 等),,請(qǐng)使用乙酸水溶液(1 至 10%),,并進(jìn)行或不進(jìn)行超聲處理,。對(duì)于疏水性很強(qiáng)的肽,請(qǐng)使用 50% 乙酸水溶液,。
對(duì)于高酸性肽
如果肽含有許多酸性氨基酸(E,、D 等),請(qǐng)使用氨水溶液(1 至 10%)或揮發(fā)性堿性緩沖液(pH 高達(dá) 8),,例如 N-乙基嗎啉乙酸鹽或碳酸氫鹽,,并進(jìn)行或不進(jìn)行超聲處理。色譜分析前可能需要調(diào)整 pH 值,。
丙醇或乙腈可用于溶解一些中等大小的肽,。如果要將肽注射到柱上,有機(jī)溶劑尤其是丙醇的用量必須保持少量,,否則保留時(shí)間將受到很大影響,。
對(duì)于高疏水性肽
如果肽具有高度疏水性,具有芳香族或烴類(lèi)側(cè)鏈,,例如 Val,、Leu、Ile,、Met,、Phe、Try,、Ala,,或者如果肽是中性,則使用離液劑,,例如 DMF/D">
a,。高濃度離液鹽可通過(guò)破壞二級(jí)結(jié)構(gòu)來(lái)幫助溶解肽。
b.離液劑適合制備用于分析的溶液,,但可能會(huì)干擾用于肽研究的生物系統(tǒng)
C,。滴加 DMF 或 DMSO(最多 30%)直至肽溶解。
d.在反相色譜中,,DMF 將與緩沖液前沿一起洗脫,。峰值可能會(huì)很高,具體取決于注射量,。大多數(shù)肽的保留時(shí)間比大的 DMF 峰洗脫所需的幾分鐘要長(zhǎng)。如果肽非常小并且洗脫較早,,則注射肽時(shí)可能必須降低起始百分比,。
凍干肽的儲(chǔ)存
所有肽均應(yīng)冷藏保存,最好在 -20 ℃ 下保存,,以獲得最大穩(wěn)定性,。大多數(shù)肽在 -20 ℃ 以下儲(chǔ)存時(shí)將保持穩(wěn)定數(shù)月,。這適用于許多氨基酸衍生物、脂質(zhì),、酶和其他蛋白質(zhì)以及肽,。例外是固定化蛋白質(zhì)和肽。
使用冷藏產(chǎn)品時(shí),,應(yīng)將瓶子或小瓶加熱至室溫,。打開(kāi)前放入裝有新鮮干燥劑的干燥器中。從 -20 ℃ 起,,這可能需要一個(gè)小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間,,具體取決于包裝尺寸。如果不這樣做,,打開(kāi)瓶子或小瓶時(shí)可能會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)品上形成冷凝,,并會(huì)大大降低材料的穩(wěn)定性。打開(kāi)后,,應(yīng)稱(chēng)出所需數(shù)量以防止吸水,。對(duì)于某些吸濕性肽來(lái)說(shuō),這是一個(gè)特殊的問(wèn)題,。
溶液中肽的儲(chǔ)存
溶液中的肽比凍干肽穩(wěn)定性差得多,。為了獲得最佳結(jié)果,請(qǐng)遵循以下準(zhǔn)則,。
1. 避免反復(fù)解凍和冷凍,。建議將儲(chǔ)備溶液等分。只解凍需要的部分,。請(qǐng)勿儲(chǔ)存稀釋溶液,。
2. 為了獲得最大的穩(wěn)定性,請(qǐng)?jiān)?-20 ℃ 下儲(chǔ)存在無(wú)菌,、pH 5 至 7 的緩沖溶液中,。
3. 半胱氨酸、蛋氨酸或色氨酸等氨基酸容易氧化,,應(yīng)溶解或保存在無(wú)氧水中,。
4. 細(xì)菌污染會(huì)降解肽,因此請(qǐng)使用無(wú)菌水或緩沖液,。
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